發(fā)布時間：2022-01-26 11:26

　　血小板／T細(xì)胞活化抗原1（platelet and T cell activation antigen 1，PTA1）是1997年基因克隆的新分子，屬于免疫球蛋白超家族（IgSF）成員，胞膜外區(qū)含有2個免疫球蛋白V樣結(jié)構(gòu)域，表達(dá)于活化T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞和巨核細(xì)胞／血小板表面。IL-2、TNF-α、佛波酯（PMA）和PHA對PTA1的表達(dá)有上調(diào)作用，TGF-β有下調(diào)作用。PTA1單抗可以誘導(dǎo)血小板活化和聚集。在混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)初期加入PTA1單抗可抑制CTL的分化，同時降低NK細(xì)胞的殺傷活性。PTA1分子表達(dá)與疾病相關(guān)性的研究表明，PTA1在移植物抗宿主病、腎綜合征出血熱、尖銳濕疣患者PBMC、胃癌浸潤淋巴細(xì)胞及橋本氏甲狀腺炎浸潤T細(xì)胞中有較高水平的表達(dá)，提示PTA1與某些感染性疾病、移植排斥反應(yīng)、腫瘤及自身免疫性疾病的發(fā)生有關(guān)。PTA1配體（PTA1L）分布于活化T淋巴細(xì)胞、Jurkat細(xì)胞、Colo205結(jié)腸癌細(xì)胞系以及某些黑色素瘤細(xì)胞等。鑒于此，本室已向第七屆國際白細(xì)胞分化抗原專題會議提出為PTA1分子申請新的CD編號。 實際上，CD分子分化中細(xì)胞譜系（lineage）的特... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

重組質(zhì)拉pGEM一3zF(+)一PATI的酶切鑒定.eneonoeon一+一

第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文研究內(nèi)容高辛精標(biāo)記的NeoRcNA探針(10昭L/)進(jìn)行雜交，結(jié)果呈藍(lán)紫色，顏色的深淺與稀釋度成正比(圖1.4).交叉雜交:即將含有探針序列的重組質(zhì)粒pGME一3zF+()一PATI和試劑盒中對照質(zhì)粒PSPT18一Ne。分別與試劑盒中地高辛精標(biāo)記的Ne。。NRA探針和本實驗所標(biāo)記的地高辛精TPAI。NRA探針進(jìn)行雜交，未見明顯的藍(lán)紫色(結(jié)果未顯示)，說明標(biāo)記探針具有良好的特異性.根據(jù)陽性對照佑計，標(biāo)記探針的總量約為10畔.4.原位雜交結(jié)果光鏡下觀察可見雜交反應(yīng)標(biāo)記的PTAlmRNA陽性細(xì)胞主要分布于人脾臟脾小體周邊動脈周圍淋巴鞘和胸腺小葉周邊的胸腺皮質(zhì)區(qū)，但在淋巴結(jié)中未見明顯分布(圖1.5一1.8).被標(biāo)記的結(jié)構(gòu)內(nèi)均有藍(lán)色或藍(lán)黑色的雜交反應(yīng)物沉著，與未標(biāo)記的結(jié)構(gòu)有明顯區(qū)別.藍(lán)色或藍(lán)黑色的雜交反應(yīng)物主要分布于胞質(zhì)中，但在某些細(xì)胞的胞核中亦有分布.兩種對照實驗均未見特異性著色，說明本方法具有特異性.圖1.2重組質(zhì)拉pGEM一3zF(+)一PATI的酶切鑒定Figl.2IdentifieationofereombinnatPlasmidPGEM一3ZF(+)一PTAIbyersrtietione‘以medigestionl:入DNA尼eoRI

其中1條為750bp左右;用EcRoI也可以切成兩條帶，其中的小片段約為25b0p，所獲結(jié)果與酶切圖譜相符(圖1.2).NDA序列測定證實，重組質(zhì)粒中含有TPAI胞膜外區(qū)基因片段且插入方向正確(圖1.3).2.PTAlcRNA探針的制備重組質(zhì)粒pGEM一3ZF(+)一PTAI經(jīng)EeoRI酶切后，用酚、氛仿抽提，乙醇沉淀回收可得到線狀PTAI模板DNA(圖1.2)。上述線性模板NDA片段，用地高辛精RcNA標(biāo)記試劑盒進(jìn)行cNRA探針體外轉(zhuǎn)錄和標(biāo)記合成反應(yīng)，得到的反應(yīng)產(chǎn)物即為探針，其長度經(jīng)計算為507Pb。3.斑點雜交將含有探針序列的重組質(zhì)粒pGEM一3Fz(+)一PTAI和試劑盒中的對照質(zhì)粒PSPT18一Ne。分別與地高辛精標(biāo)記的PT人loRNA探針和試劑盒中地______47博士研究生:陳麗?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3610411