小腸上皮細胞間的淋巴細胞（intestine intraepithelial lymphocytes，iIEL）是位于小腸絨毛柱狀上皮細胞間的一類組織松散的浸潤淋巴細胞。它們在粘膜免疫防御和口服免疫耐受形成等方面起著重要的作用。它們在形態(tài)、表型、起源、發(fā)育、以及功能上與傳統(tǒng)部位（脾和淋巴結(jié)等）的淋巴細胞有所不同，而這種差異的本質(zhì)應(yīng)該存在著相應(yīng)的分子基礎(chǔ)。本研究旨在比較小鼠iIEL與脾臟T淋巴細胞的基因表達差異，初步解釋上述基因表達差異之特點；并且對iIEL進行了初步的研究，以期為闡明iIEL結(jié)構(gòu)與功能特征提供資料與依據(jù)。 首先，通過建立iIEL與脾臟T淋巴細胞的cDNA差異減除文庫，來比較兩者的基因表達差異并初步分析iIEL優(yōu)勢表達的基因。我們采用percoll密度梯度法分離iIEL，尼龍毛柱法分離脾臟T淋巴細胞，兩者的純度都在90％以上。應(yīng)用改良后的差減雜交法，在消化后的cDNA兩端連接特異的銜接子，通過減除雜交從iIEL中去除與脾T淋巴細胞相同的表達基因，再經(jīng)抑制性PCR擴增，并與質(zhì)粒載體連接，得到二者的cDNA減除文庫。用反向Northern blot初步篩選出iIEL優(yōu)勢... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

ESTDNA序列用BLAST系統(tǒng)進行比對分析

中目協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位倫文3.iIEL中TCRap十和TCRY6+T細胞的分選用FITC標(biāo)記的抗TCR一a口單抗和PE標(biāo)記的抗TCR一Y6的單抗與IiEL相互作用，經(jīng)流式細胞分選儀分選。結(jié)果顯示，在IiEL中，TCR+和TCRv己+T細胞的比例分別為33%和51%(圖1IB);分選的TCR+和TCRv6+T細胞的純度分別可達97%和99%(圖1IC和圖1ID)。

B圖13LPS和鞭毛蛋白對IiEL的體外促增殖作用ofiIELtoLPSandflagellininvitroB:FIagellindilutedinto60林g/ml，l卜g/ml，0.1林g/mland0.01拼留mlresPeetive!y.6林g/，nl，0.6抖g/mland0.06林g/mlresPeetivelyFig13ProliefrativeresPonseA:LPSwasdilutedinto10林9/1。!，

【參考文獻】：
期刊論文
[1]腸出血性大腸桿菌O157:H7脂多糖抗原的制備及鑒定[J]. 潘勁草,黃志成,余文炳,李學(xué)梅.  中國人獸共患病雜志. 1999(03)



本文編號：3587920