異常的表皮生長因子受體（EGFR）表達是包括膠質(zhì)母細胞瘤（GBM）在內(nèi)的多種腫瘤的共同特征。因此，EGFR逐漸成為腫瘤治療的重要靶標(biāo)。本研究的目的在于制備一種能夠靶向EGFR陽性腫瘤細胞，并具有腫瘤細胞抑制功能的抗腫瘤免疫導(dǎo)向重組蛋白。核糖體失活因子LP1具有分子量�。�5kDa）和蛋白合成抑制功能，因此本研究選擇其作為重組蛋白antiEGFR/LP1的核心元件。本研究將LP1通過柔性連接肽連接至抗EGFR單鏈抗體序列C末端，通過大腸桿菌原核表達系統(tǒng)對其進行了表達，并利用Ni2+柱對表達獲得的重組蛋白進行了復(fù)性和純化。SDS-PAGE和westernblotting分析結(jié)果表明，重組蛋白antiEGFR/LP1得到了有效表達；熒光共聚焦和流式細胞術(shù)分析結(jié)果顯示，重組蛋白能夠與EGFR陽性細胞U251有效結(jié)合且主要集中于細胞膜表面，而在相同作用時間和作用劑量條件下與EGFR陰性細胞Jurkat無結(jié)合活性。本研究還通過MTT染色分析了antiEGFR/LP1對U251細胞和Jurkat細胞的抑制作用。實驗結(jié)果表明，antiEGFR/LP1能夠有效抑制EGFR陽性細胞U251的增殖，且作用時間... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：142 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

1免疫毒素的作用機理Figure1.2.1Mechanismofactionofimmunotoxins表1.2.1免疫毒素的分類Table1.2.1Classificationoftoxins毒素來源機制結(jié)構(gòu)

ta c a tg ga g c tg a gc a gg c tg a ca tc tg a c ga c a c gg c cg ta ta tt a ct gt gc a a tt c c cc t gg g g c ca a g gg a c a a tg g tc a cc g tc tc tt c a g c ct cc a c c a a gg g c c c a tc g g tc tt c c c cg c gg g cc g c a ga a ca a a a a ct ca tc tc a g a a ga gg a tc tg a a tg g g gc c g ca ta g G G A G G T G G A G G T T C AG G A G G T G G AG G T T CA T C T A G AG AT A T C G TC A C C A CT A A T A G TG AG C G G CC G C 基 因 的合 成 1 基 因序 列 （ AF 5 3 7 3 45 ）、 連接 肽 序及 H I S ta g 序 列的 基 因片 ， 并 連 接至 pG H 載體 ，命 名 為 pG H - L P1 。 LP 1 基因 序列 如 下 A cc a c gg a c c ga g ta tg a gg c gt g tc g a gt tc ga tg c c a a gt g gc g g a gc a tg gg g tg ga c tg tg a ga a gc g gc tg a g gg a gc g a ga g gg c c gg c gg a g G T C G AC CA CC A C Ca G C G G CC G C -a n ti E G FR /L P 1 的構(gòu) 建I/ S a l I 分 別 雙 酶 切 質(zhì) 粒 pG H - L P1 和 pG H - EG F R ， 并 將 LP 1 基pG H - E G FR 載體 ，構(gòu) 建 中間 重 組質(zhì) 粒 pG H -a n ti E G FR /L P 1 （圖

圖 2 .1 .2 pE T - a nt i E G F R/ L P1 質(zhì) 粒 構(gòu)建 圖 Fi g u re 2 .1 .2 T he co n s tr u ct io n of th e pl a s m id pE T- a nt i E G F R/ L P- E G FR 的構(gòu) 建I/ N ot I 分 別 雙 酶 切質(zhì) 粒 pG H -E G F R 和 pE T 2 8a (+ )， 并 將 a nt i E G 接 至經(jīng) 雙 酶切 的 pE T 2 8a (+ ) 載體 ， 構(gòu)建 原 核表 達 質(zhì)粒 pE T - E G F- L P 1 的構(gòu) 建I/ N o t I 分 別 雙 酶 切 質(zhì) 粒 pG H -L P1 和 pE T 2 8a ( + )， 并 將 LP 1 基 pE T 2 8 a (+ )載 體 ，構(gòu) 建 原 核表 達 質(zhì)粒 pE T- L P 1 （ 圖 2 .1 .4 ）。 -a n ti E G FR /E G F P 的構(gòu) 建I/ S a l I 分別 雙酶 切 質(zhì)粒 pG H - EG F R 和 pV A X 1 -E G F P ，并將 EG F 切 的 pG H -E G F R 載 體 ，構(gòu) 建 中間 重 組質(zhì) 粒 pG H - a n ti E G FR /E G F- a nt i E G F R/ E G FP 的構(gòu) 建 I/ N o t I 分 別 雙 酶 切 質(zhì) 粒 pG H - a n ti E G FR /E G F P 和 pE T 2 F P 片 段 連 接 至 經(jīng) 雙 酶 切 的 pE T 2 8 a ( + ) 載 體 ， 構(gòu) 建 原

【參考文獻】：
期刊論文
[1]漢坦病毒S0.7基因新型重組腺病毒的構(gòu)建及鑒定[J]. 李凱,李璞媛,白文濤,胡剛,吳興安,徐志凱,張芳琳.  細胞與分子免疫學(xué)雜志. 2010(05)



本文編號：3587115