發(fā)布時(shí)間：2022-01-13 09:13

　　目的優(yōu)化肺炎鏈球菌CSR SCS2 clone1小鼠的免疫程序,同時(shí)建立肺炎鏈球菌C多糖（C polysaccharides,CPs）雜交瘤細(xì)胞株。方法制備免疫抗原CSR SCS2 clonel,進(jìn)行小鼠免疫程序優(yōu)化:抗原量[（0. 5～2）×10⁸個(gè)、（1～4）×108個(gè)、（2. 4～10）×10⁸個(gè))]、免疫間隔時(shí)間（3 d、1周、2周）、免疫途徑（腹腔、腹股溝及尾靜脈）,同時(shí)確定抗原是否添加佐劑,間接ELISA法檢測小鼠血清抗體水平。采用優(yōu)化程序免疫小鼠,取血清效價(jià)最高的小鼠脾細(xì)胞,經(jīng)傳統(tǒng)單克隆抗體制備技術(shù)建立肺炎鏈球菌C-Ps雜交瘤細(xì)胞株,并檢測細(xì)胞株的染色體數(shù)目及其分泌抗體的穩(wěn)定性及特異性。結(jié)果確定小鼠最適免疫程序?yàn)?抗原量為（1～4）×108個(gè),且需添加弗氏佐劑,免疫間隔時(shí)間為1周,免疫途徑為腹股溝注射。最適程序免疫小鼠血清抗體效價(jià)達(dá)1∶12 000以上。建立了3株肺炎鏈球菌C-Ps雜交瘤細(xì)胞,命名為A4、G8、H10株,染色體數(shù)目分別為98、102和102,分泌的抗體具有良好的穩(wěn)定性和特異性。結(jié)論成功優(yōu)化了肺炎鏈球菌小鼠的免疫程... 

【文章來源】：中國生物制品學(xué)雜志. 2019,32(08)CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細(xì)胞及菌株
    1.2 多糖
    1.3 主要試劑
    1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.5 免疫抗原的制備
    1.6 肺炎鏈球菌小鼠免疫程序的優(yōu)化
        1.6.1 抗原量
        1.6.2 免疫間隔時(shí)間
        1.6.3 免疫途徑
        1.6.4 佐劑
    1.7 小鼠血清抗體效價(jià)的檢測
    1.8 雜交瘤細(xì)胞株的建立
        1.8.1 小鼠免疫
        1.8.2 細(xì)胞融合及雜交瘤細(xì)胞篩選
        1.8.3 雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清抗體效價(jià)測定
    1.9 雜交瘤細(xì)胞株的檢定
        1.9.1 雜交瘤細(xì)胞分泌抗體的穩(wěn)定性
        1.9.2 雜交瘤細(xì)胞染色體分析
        1.9.3 雜交瘤細(xì)胞分泌抗體的特異性檢測
    1.1 0 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 肺炎鏈球菌小鼠免疫程序的優(yōu)化
        2.1.1 抗原量
        2.1.2 免疫間隔時(shí)間
        2.1.3 免疫途徑
        2.1.4 佐劑
    2.2 免疫小鼠血清抗體效價(jià)檢測
    2.3 雜交瘤細(xì)胞株的建立
        2.3.1 陽性雜交瘤細(xì)胞株的篩選
        2.3.2 雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清抗體效價(jià)
    2.4 雜交瘤細(xì)胞株的檢定
        2.4.1 雜交瘤細(xì)胞分泌抗體穩(wěn)定性
        2.4.2 雜交瘤細(xì)胞染色體分析
        2.4.3 雜交瘤細(xì)胞分泌抗體的特異性檢測
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]分泌抗山羊γ干擾素單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的制備與鑒定[J]. 張洪杰,桑鋒鋒,劉阿華,李言言,王毅,陳德坤.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2017(12)
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[3]A族鏈球菌多價(jià)疫苗的完善制備及其動(dòng)物免疫保護(hù)作用研究[J]. 王家超,袁婷,鄒東花,高雪,郭奕陽,李劍,張征崢,楊麗娟,馬翠卿.  中國免疫學(xué)雜志. 2017(03)
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[6]山羊痘病毒ORF122蛋白雜交瘤細(xì)胞的構(gòu)建及其單克隆抗體的制備[J]. 孫劍峰,楊明,陳伯祥,賀泂杰,李杰.  中獸醫(yī)學(xué)雜志. 2015(10)



本文編號(hào)：3586143