乙型肝炎病毒（HBV）感染致肝細(xì)胞損傷機(jī)制，很大程度上與病毒蛋白和肝細(xì)胞蛋白間的相互作用相關(guān)。因此，研究HBV各抗原成分與肝細(xì)胞內(nèi)的蛋白相互作用及其機(jī)理能在一定程度上對(duì)HBV的致病機(jī)制做出解釋，為尋找有效防治HBV的方法提供新線索。 酵母雙雜交技術(shù)是一種研究蛋白-蛋白間相互作用的比較快速、可靠并可大規(guī)模篩選的方法。本實(shí)驗(yàn)所采用酵母雙雜交系統(tǒng)-3，利用兩種單倍體酵母a和α接合型可以配合形成二倍體，而其中表達(dá)的外源蛋白仍能相互作用，免去了低效率文庫(kù)質(zhì)粒與誘餌質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的問(wèn)題，大大提高了雜交效率；在原技術(shù)基礎(chǔ)上增加了3個(gè)報(bào)告基因，降低了假陽(yáng)性率，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真陽(yáng)性率達(dá)95％。我們利用該技術(shù)，根據(jù)HBV ayw亞型的基因全序設(shè)計(jì)引物，多聚酶鏈反應(yīng)（PCR）方法擴(kuò)增所得到前-S2、HBeAg、HBcAg、HBxAg等基因編碼序列，經(jīng)測(cè)序鑒定正確分別連接入酵母表達(dá)載體pGBKT7中構(gòu)建“誘餌”質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞AH109（a型）并在其內(nèi)表達(dá)，Western-blotting驗(yàn)證。然后與轉(zhuǎn)化了人肝cDNA文庫(kù)質(zhì)粒pACT2的乙型肝炎病毒相互作用蛋白的克隆化鑒定及新基因功能的初步研究2－103... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：106 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
主要實(shí)驗(yàn)材料及儀器設(shè)備
縮寫字母中英文全稱
前言
第一部分 酵母雙雜交篩選肝文庫(kù)中HBV結(jié)合蛋白基因
    “誘餌”載體的構(gòu)建
    HBV各抗原基因在酵母中的表達(dá)
    酵母雙雜交篩選
    討論
第二部分 體外免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
    新基因全序的克隆化研究
    體外翻譯
    體外免疫共沉淀
    討論
第三部分 新基因功能的初步研究
    新基因的亞細(xì)胞定位
    新基因?qū)Σ溉閯?dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
    新基因肝細(xì)胞內(nèi)結(jié)合蛋白的研究
    新基因的基因芯片研究
    討論
參考文獻(xiàn)
小結(jié)
綜述一： 乙肝病毒X蛋白功能的研究進(jìn)展
綜述二： 分子伴侶及其與乙型肝炎病毒的關(guān)系
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號(hào)：3574388