目的:探討microRNA-181a（miR-181a）對缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)下大鼠心肌細(xì)胞株H9c2凋亡的作用。方法:通過生物信息學(xué)軟件篩選出可調(diào)控Bcl-2表達(dá)的miRNAs。建立H9c2細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型,通過Western blot檢測Bcl-2蛋白表達(dá)變化,熒光定量PCR檢測miR-181a表達(dá)變化。進(jìn)一步構(gòu)建Bcl-2的熒光素酶報告載體,雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)檢測熒光素酶的表達(dá)變化。采用體外合成的大鼠miR-181a的模擬物（mimic）和抑制劑（inhibitor）,用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的H9c2細(xì)胞48h后,缺氧/復(fù)氧處理細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)分為4組:正常對照組（CTL）、缺氧/復(fù)氧組（H/R）、缺氧復(fù)氧加miR-181a的模擬物組（mimic）、缺氧復(fù)氧加miR-181a的抑制劑組（inhibitor）。TUNEL法檢測各組細(xì)胞凋亡;Western blot分析各組凋亡關(guān)鍵蛋白cleaved caspase-3的表達(dá)量的變化。結(jié)果:生物學(xué)軟件預(yù)測miR-181a可調(diào)控Bcl-2蛋白的表達(dá),在缺氧/復(fù)氧模型中Bcl-2蛋白的表達(dá)明顯下調(diào),而miR-181a的表達(dá)上升近4倍。成功構(gòu)建雙熒光酶... 

【文章來源】：臨床心血管病雜志. 2015,31(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

圖１生物學(xué)軟件預(yù)測可能調(diào)控Ｂｃｌ－２的ｍｉＲＮＡｓＦｉｇｕｒｅ１ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｏｆｔｗａｒｅｐｒｅｄｉｃｔｓｔｈｅｍｉＲＮＡｓｒｅｇｕｌａｔｅｄ

瀕死心肌或縮小心肌梗死范圍、保護(hù)心功能起了很重要的作用，但灌注損傷的問題也變得越來越突出，引起了人們高度的重視［５］。缺血再灌注損傷的特征性改變是細(xì)胞凋亡，細(xì)胞凋亡的多少決定著缺血再灌注損傷的輕重，并且對缺血再灌注損傷的預(yù)后判斷具有重要意義［６－７］。許多研究顯示，細(xì)胞凋亡的發(fā)生機(jī)制主要有兩條凋亡途徑，即Ａ：熒光顯微鏡下凋亡率，綠色為ＴＵＮＥＬ染色陽性細(xì)胞核，藍(lán)色為Ｄａｐｉ標(biāo)記細(xì)胞核。Ｂ：細(xì)胞凋亡率的統(tǒng)計圖。與ＣＴＬ比較，１）Ｐ＜０．０１。圖４Ｈ９ｃ２細(xì)胞在進(jìn)行不同處理后測凋亡率（×２００）ＴＵＮＥＬ及Ｄａｐｉ雙染色Ｆｉｇｕｒｅ４Ｔｈｅｒａｔｅｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｕｎｄｅｒｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ（×２００）圖５ｍｉＲ－１８１ａ模擬物和抑制劑對Ｈ／Ｒ處理Ｈ９ｃ２后凋亡蛋白ｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ－３表達(dá)的影響Ｆｉｇｕｒｅ５ＥｆｆｅｃｔｏｆｍｉＲ－１８１ａｏｎｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ－３線粒體凋亡途徑和死亡受體凋亡途徑，目前普遍認(rèn)為心肌細(xì)胞凋亡在很大程度上是通過線粒體凋亡途徑，而且線粒體凋亡途徑在介導(dǎo)心肌細(xì)胞凋·６６７·

缺血再灌注損傷的預(yù)后判斷具有重要意義［６－７］。許多研究顯示，細(xì)胞凋亡的發(fā)生機(jī)制主要有兩條凋亡途徑，即Ａ：熒光顯微鏡下凋亡率，綠色為ＴＵＮＥＬ染色陽性細(xì)胞核，藍(lán)色為Ｄａｐｉ標(biāo)記細(xì)胞核。Ｂ：細(xì)胞凋亡率的統(tǒng)計圖。與ＣＴＬ比較，１）Ｐ＜０．０１。圖４Ｈ９ｃ２細(xì)胞在進(jìn)行不同處理后測凋亡率（×２００）ＴＵＮＥＬ及Ｄａｐｉ雙染色Ｆｉｇｕｒｅ４Ｔｈｅｒａｔｅｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｕｎｄｅｒｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ（×２００）圖５ｍｉＲ－１８１ａ模擬物和抑制劑對Ｈ／Ｒ處理Ｈ９ｃ２后凋亡蛋白ｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ－３表達(dá)的影響Ｆｉｇｕｒｅ５ＥｆｆｅｃｔｏｆｍｉＲ－１８１ａｏｎｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ－３線粒體凋亡途徑和死亡受體凋亡途徑，目前普遍認(rèn)為心肌細(xì)胞凋亡在很大程度上是通過線粒體凋亡途徑，而且線粒體凋亡途徑在介導(dǎo)心肌細(xì)胞凋·６６７·


本文編號：3558956