目的： 伴隨卵母細(xì)胞生長(zhǎng)的是核糖體和mRNAs轉(zhuǎn)錄活化，小鼠大約在排卵前6天，卵母細(xì)胞生長(zhǎng)和分化結(jié)束而達(dá)到成熟，此時(shí)卵母細(xì)胞中合成和積累了多種RNA、蛋白質(zhì)和細(xì)胞器，這些構(gòu)成了早期胚胎發(fā)育的母源物質(zhì)。胚胎發(fā)育從受精開(kāi)始，新受精卵中就存儲(chǔ)大量的母源物質(zhì)，隨著胚胎進(jìn)一步發(fā)育，母源mRNAs逐漸消耗，必然需要合子基因組的適時(shí)表達(dá)并完全取代之，以實(shí)現(xiàn)由母型向合子型調(diào)控過(guò)渡，缺乏合子基因組激活的動(dòng)物胚胎無(wú)法進(jìn)一步發(fā)育。已有研究表明，小鼠合子基因組激活發(fā)生于1-細(xì)胞晚期，從未受精卵到單細(xì)胞胚胎是母源物質(zhì)控制，由母源物質(zhì)支持并指導(dǎo)了早期胚胎發(fā)育直到合子基因組激活。因此，母源物質(zhì)對(duì)早期胚胎發(fā)育的作用日益受到重視，但對(duì)早期胚胎發(fā)育或?qū)β涯讣?xì)胞向合子過(guò)渡有影響的作用的母源基因極少被克隆或識(shí)別。所以，我們以生發(fā)泡完整卵母細(xì)胞（GV卵）為檢測(cè)子，8-細(xì)胞胚胎為驅(qū)趕子，應(yīng)用抑制消減雜交技術(shù)建立GV卵中母源基因的消減cDNA文庫(kù)，從中獲取小鼠母源基因，為進(jìn)一步研究母源基因在卵母細(xì)胞的發(fā)育成熟、早期胚胎發(fā)育和合子基因組激活中的作用奠定基礎(chǔ)。 方法：第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文 1、應(yīng)用抑制消減雜交技術(shù)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：105 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

SSH的第2輪PCR擴(kuò)增

.4RT-PCR結(jié)果:結(jié)果顯示表2中3個(gè)基因在GV卵中有表達(dá)，而在8一細(xì)胞胚胎中不表達(dá)(圖3)。表2所選取3個(gè)克隆的對(duì)應(yīng)同源基因和引物序列序號(hào)同源基因引物序列預(yù)計(jì)擴(kuò)增長(zhǎng)度6Peroxiredoxinll巧T淋巴細(xì)胞瘤斷裂點(diǎn)l25妊娠17天羊膜cDNA克隆F:5’一TI一l’一ICI’ACCCACTGGACTTCAC一3’617R:5’一GGTGGGI’AATGAGAAAGCI丁CA一3F:5’一CGTGAGGAAGAAGGCAAGT-3’296R:5’一TCTGrTTCGCI’AGTCATGTCCTI’-3’F:5’一AACTGCArGTGACACATTGCC一3’391R:5’一TCC‘l一l一l’GGTGAI，GAACAGCA一3’

的作用奠定基礎(chǔ)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Clone6基因在GV卵、Mll卵、1一細(xì)胞胚胎和2一細(xì)胞胚胎有表達(dá)，而在4一細(xì)胞胚胎、8一細(xì)胞胚胎、�？芭咛ズ湍遗呶匆�(jiàn)表達(dá)(圖4)。Clone25基因同樣在GV卵、Mll卵、1一細(xì)胞胚胎和2一細(xì)胞胚胎有表達(dá)，而在4一細(xì)胞胚胎、8一細(xì)胞胚胎、�？芭咛ズ湍遗呶匆�(jiàn)表達(dá)，可是在GV卵、Mll卵、1一細(xì)胞胚胎和2一細(xì)胞胚胎中出現(xiàn)兩條電泳帶，短片段為391bp，與我們預(yù)期要擴(kuò)增的片段長(zhǎng)度一致，該片段在GV卵高表達(dá)，從Mll卵開(kāi)始表達(dá)下降;長(zhǎng)片段為62lbp，其在GV卵、Mll卵、1一細(xì)胞胚胎和2一細(xì)胞胚胎中的表達(dá)未見(jiàn)明顯變化

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]共聚焦激光掃描顯微術(shù)研究天花粉蛋白對(duì)小鼠胚胎細(xì)胞的作用機(jī)制[J]. 徐慧,張春陽(yáng),馬輝,陳瓞延.  分析科學(xué)學(xué)報(bào). 2001(06)
[2]早期胚胎發(fā)育母源基因的表達(dá)調(diào)控[J]. 朱新產(chǎn),葛文華,王寶維.  生命的化學(xué). 2001(05)
[3]“生存還是毀滅”,發(fā)育還是阻滯──小鼠早胚體外發(fā)育2-細(xì)胞阻滯產(chǎn)生機(jī)制初析[J]. 邱佳菁,李逸平.  生命科學(xué). 2000(05)
[4]M16添加�；撬岷虴DTA支持昆明白小鼠體外受精并發(fā)育至囊胚[J]. 王敏康,劉冀瓏,李光鵬,廉莉,江一平,張?zhí)?陳大元.  遺傳. 2000(05)
[5]昆明白小鼠1細(xì)胞胚胎體外培養(yǎng)系統(tǒng)的研究[J]. 張守全,孫拓.  動(dòng)物學(xué)報(bào). 1995(04)
[6]小鼠生后卵巢發(fā)育的形態(tài)學(xué)與組織化學(xué)研究[J]. 諸定壽,黃秀琴.  首都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 1994(01)
[7]哺乳類(lèi)早期胚胎發(fā)育阻滯的形成與突破[J]. 李逸平,左嘉客.  細(xì)胞生物學(xué)雜志. 1992(04)
[8]小鼠卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)成熟及“試管小鼠”的研究[J]. 尹海林,陳秀蘭.  遺傳. 1989(03)



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