目的探討原鈣黏蛋白7（protocadherin 7, Pcdh7）基因在促進(jìn)小鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞凋亡中的作用及可能機(jī)制。方法原代培養(yǎng)的C57BL/6小鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞,隨機(jī)分為空載組（轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒）、Pcdh7過(guò)表達(dá)組（轉(zhuǎn)染Pcdh7過(guò)表達(dá)質(zhì)粒）、Ca²⁺通道阻滯組(轉(zhuǎn)染Pcdh7過(guò)表達(dá)質(zhì)粒及Ca²⁺通道抑制劑西尼地平)。轉(zhuǎn)染48 h,采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)3組神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)Ca²⁺熒光強(qiáng)度,CCK-8法檢測(cè)3組神經(jīng)元細(xì)胞存活率,熒光探針?lè)z測(cè)3組神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率。結(jié)果 Pcdh7過(guò)表達(dá)組神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)Ca²⁺熒光強(qiáng)度[（30.57±4.34）MFI]高于空載組[（18.60±0.57）MFI]和Ca²⁺通道阻滯組[（18.63±1.97）MFI]（P<0.05）,空載組與Ca²⁺通道阻滯組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;Pcdh7過(guò)表達(dá)組神經(jīng)元細(xì)胞存活率吸光度值（0.64±0.04）低于空載組（1.01±0.03）和Ca²⁺

【文章來(lái)源】：中華實(shí)用診斷與治療雜志. 2019,33(09)

【文章頁(yè)數(shù)】：3 頁(yè)

【部分圖文】：

圖２３組皮層神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的倒置熒光顯微鏡圖（×２０）ａｂｃ注：ａ為空載組；ｂ為Ｐｃｄｈ７過(guò)表達(dá)組；ｃ為Ｃａ２＋通道阻滯組

１．２方法１．２．１試劑及儀器Ｔｒｉｚｏｌ試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、ＶｉａＦｅｃｔＴＭＴａｎｓｆｅｃｔｉｏｎＲｅａｇｅｎｔ試劑盒（美國(guó)Ｐｒｏｍｅｇａ公司）；ＳＹＢＲＧｒｅｅｎｓｕｐｅｒｍｉｘ熒光試劑盒（美國(guó)Ｒｏｃｈｅ公司）；Ｆｌｕｏ－３ＡＭＣａ２＋指示劑（美侖生物科技有限公司）；西尼地平（美國(guó)Ｓｅｌｌｅｃｔ公司）；ＣＣＫ－８檢測(cè)試劑盒（德國(guó)Ｍｅｒｋ公司）；Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄｖｉａｂｉｌｉｔｙ／ＣｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙＫｉｔ試劑盒、ＤＭＥＭ培養(yǎng)基（美國(guó)Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）；Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ無(wú)血清培養(yǎng)基、無(wú)血清培養(yǎng)基添加劑Ｂ－２７－Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（５０×）（美國(guó)Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）；ＩＸＴＩ－１２ＦＬ／ＰＨ倒置熒光顯微鏡（日本Ｏｌｙｍｐｕｓ公司）；Ｍ２００Ｐｒｏ多功能酶標(biāo)儀（瑞士Ｔｅｃａｎ公司）。１．２．２原代皮層神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)孕１８．５ｄＣ５７ＢＬ／６小鼠腹腔注射過(guò)量戊巴比妥鈉后處死，迅速取出胚胎，分離大腦皮層，剪碎、研磨后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)０．２５％胰蛋白酶消化２５ｍｉｎ。取消化后的皮層組織，分別用１ｍＬ和２００μＬ槍頭輕輕吹打３次；靜置２ｍｉｎ后吸取上清并進(jìn)行皮層神經(jīng)元細(xì)胞計(jì)數(shù)。將皮層神經(jīng)元細(xì)胞均勻鋪在多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)皿上培養(yǎng)２ｈ；用Ｎｅｕｒｏｂａｌ完全培養(yǎng)基（５０×Ｂ２７＋１００×ＧｌｕｔａＭＡＸ＋Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ）進(jìn)行培養(yǎng)，３ｄ后換液。１．２．３原代皮層神經(jīng)元細(xì)胞轉(zhuǎn)染培養(yǎng)第１天，原代培養(yǎng)的小鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞隨機(jī)分為空載組

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]E-鈣黏蛋白與波形蛋白在胃癌中的表達(dá)及意義[J]. 董海峰,鄭英斌,龐志剛,劉新江,董玉璽,羅乾坤,王世行.  中華實(shí)用診斷與治療雜志. 2018(06)
[2]ICR小鼠腦發(fā)育過(guò)程中原鈣黏蛋白7a表達(dá)及意義[J]. 肖華娟,亓月,李佳娜,熊軼.  中華實(shí)用診斷與治療雜志. 2017(11)
[3]癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞黏附分子1與CD105和CD34標(biāo)記腫瘤微血管密度在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義[J]. 周紅林,陳曦,田紅偉,岳文彬.  中華實(shí)用診斷與治療雜志. 2017(11)
[4]人參皂苷Rg2對(duì)東莨菪堿誘導(dǎo)阿爾茨海默病小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響[J]. 商崇智,趙明亮.  中華實(shí)用診斷與治療雜志. 2017(05)



本文編號(hào)：3523922