研究目的與意義:流感病毒感染可引起人呼吸系統(tǒng)疾病,同時(shí)亦可感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）,導(dǎo)致部分感染人群產(chǎn)生CNS病變。在流感相關(guān)性腦病與腦炎綜合征病人的腦脊液中促炎癥細(xì)胞因子濃度出現(xiàn)異常升高。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,尤其是小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞是CNS細(xì)胞因子產(chǎn)生的主要來(lái)源,但其在流感病毒感染CNS時(shí)的功能仍不清楚。因此,探索小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞在流感病毒感染后所發(fā)生的病理變化及免疫反應(yīng),為明確膠質(zhì)細(xì)胞在感染中的作用、理解CNS感染流感病毒后的發(fā)病機(jī)制提供必要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。此外,根據(jù)人流感病毒基因組核酸的類(lèi)型、進(jìn)化趨勢(shì)及預(yù)實(shí)驗(yàn)的線(xiàn)索,推測(cè)流感病毒與APOBEC家族蛋白存在可能的潛在相關(guān)性。探尋APOBEC與流感病毒復(fù)制及突變的關(guān)系,為尋找對(duì)流感病毒具有潛在抑制作用的因子、理解病毒進(jìn)化因素提供新的思路。實(shí)驗(yàn)方法:1.明確病毒遺傳背景、建立反向遺傳平臺(tái):選取人A/Shantou/169/2006（H1N1）和禽A/Chicken/Guangdong/1/05（H5N1）流感病毒,對(duì)病毒全基因組進(jìn)行克隆測(cè)序,構(gòu)建反向遺傳通用載體及含上述兩種病毒全基因組片段的質(zhì)粒;2.探討膠質(zhì)細(xì)胞感染流感病毒后的病... 

【文章來(lái)源】：汕頭大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：133 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

質(zhì)粒polI–polII雙向啟動(dòng)子流感病毒反向遺傳系統(tǒng)

神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分泌的促炎癥因子，如 IL-1β、IL-6 以及 T 中過(guò)度釋放的促炎癥細(xì)胞因子和趨化因子會(huì)引發(fā)神經(jīng)元細(xì)病理?yè)p傷[64,65]、小膠質(zhì)細(xì)胞激活[66]，并能夠影響外周免疫系的反應(yīng)[67]。因此，小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞在腦內(nèi)免疫中感染，尤其是 H5N1 毒株，在體外會(huì)誘導(dǎo)多種細(xì)胞釋放高濃內(nèi)的局部器官和血漿中也發(fā)現(xiàn)存在著大量釋放和積累的促β 等，通過(guò)細(xì)胞因子的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，產(chǎn)生以細(xì)胞因子分泌失調(diào)因子反應(yīng)（Pro-inflammatory cytokines response）[68]，即細(xì)胞torm）[69]，引發(fā)組織細(xì)胞、免疫細(xì)胞釋放趨化因子、黏附因集并激活巨噬細(xì)胞、T 細(xì)胞等免疫效應(yīng)細(xì)胞，從而可能引發(fā) 1-2 所示），這種以促炎癥細(xì)胞因子過(guò)度釋放導(dǎo)致的細(xì)胞因5N1 引起嚴(yán)重疾病的可能原因[70,71]。

圖1-3APOBEC基因染色體定位（A）、蛋白特性（B）及其胞嘧啶脫氨催化活性位點(diǎn)（C）Fig. 1-3. The chromosome location (A), protein (B), and cytidine deaminase domains (C) ofthe APOBEC family（圖片來(lái)源：Reuben S. Harris, Mark T. Liddament. Nature Rev Immunol, 2004,4:868-877，以及 http://migg.files.wordpress.com/2007/05/apobece.jpg）人流感病毒在進(jìn)化過(guò)程中，基因組的GC（鳥(niǎo)嘌呤與胞嘧啶）含量穩(wěn)定下降，AU（腺嘌呤和尿嘧啶）含量逐步上升，而禽流感病毒則沒(méi)有出現(xiàn)類(lèi)似的進(jìn)化趨勢(shì)[107]。由于A(yíng)POBEC家族蛋白成員具有誘導(dǎo)病毒基因組產(chǎn)生C到U的突變作用，且目前尚沒(méi)有發(fā)現(xiàn)禽類(lèi)具有APOBEC同源基因物的報(bào)道，因此人APOBEC家族蛋白的脫氨基作用，可能是誘導(dǎo)人流感病毒基因組發(fā)生穩(wěn)定的C到U進(jìn)化趨勢(shì)的可能原因之一[107]。在研究APOBEC家族成員對(duì)HIV基因組超突變作用中，某些APOBEC家族蛋白能夠直接誘導(dǎo)HIV基因組RNA的突變[98]。此外，在預(yù)實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)一些細(xì)胞在感染流感病毒后，其細(xì)胞內(nèi)某

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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本文編號(hào)：3504857