結(jié)核病依然對人類健康具有極大威脅的傳染性疾病之一，結(jié)核分枝桿菌（以下簡稱結(jié)核菌）是結(jié)核病的病因，結(jié)核菌能在巨噬細(xì)胞內(nèi)長期存活是其引起結(jié)核病的主要因素之一。研究證實，存活于巨噬細(xì)胞內(nèi)的結(jié)核菌能大量表達(dá)一種小分子熱休克蛋白Hsp16.3。Hsp16.3的大量表達(dá)引起結(jié)核菌細(xì)胞壁的明顯增厚。因此，推測Hsp16.3的表達(dá)有利于結(jié)核菌在巨噬細(xì)胞內(nèi)的存活。 Hsp16.3在天然狀態(tài)下是由三個三聚體組成的九聚體形式，Hsp16.3在體外最主要的功能就是其具有分子伴侶活性（molecular chaperone activity）。我們通過定點誘變其α-crystallin domain中的保守區(qū)域LPGV中的甘氨酸（Glycine G）為色氨酸（Tryptophan W），并結(jié)合Chaperone活性的檢測、ANS熒光探測、CD光譜技術(shù)、非變性孔徑梯度凝膠、FPLC以及內(nèi)源熒光檢測技術(shù)提出Hsp16.3九聚體的解聚是其發(fā)揮分子伴侶活性的前提，三聚體可能是其發(fā)揮分子伴侶活性的基本單位；同時，我們還認(rèn)為，Hsp16.3的LPGV區(qū)位于其三聚體與三聚體的作用面。 通過將Hsp16.3與38k... 

【文章來源】：北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所北京市

【文章頁數(shù)】：133 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

Hsp16.3多克隆抗血清，esternblotting結(jié)果

混勻，100，C走出凝膠后，停止電泳，第三節(jié)結(jié)果.3和38kDa基因融合據(jù)HsP16.3蛋白和38kD左右。從15%SDS一PAGE4kDa左右，說明融合

融合蛋白可溶性分析巧%SDS一PAGE結(jié)果蛋白質(zhì)marker;B，C分別為含pETee28a--融合基因的(DE3)破碎的上清和沉淀;D，E分別為含pETse28a一38kDa的E3)破碎的上清和沉淀第四節(jié)討論腸桿菌中高效表達(dá)的結(jié)果往往形成包涵體(inclus原因是由于異源蛋白在宿主菌中過量表達(dá)(overp內(nèi)外許多學(xué)者為解決異源蛋白在大腸桿菌中的可包括低溫誘導(dǎo)以盡量降低目的蛋白的表達(dá)速度〔4.’在內(nèi)的折疊酶以及一些分子伴侶蛋白來幫助新的目的〔’8，’幻，但結(jié)果均不理想，說明包涵體的形。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]包涵體蛋白體外復(fù)性的研究進(jìn)展[J]. 方敏,黃華樑.  生物工程學(xué)報. 2001(06)



本文編號：3497230