結(jié)核病依然對人類健康具有極大威脅的傳染性疾病之一，結(jié)核分枝桿菌（以下簡稱結(jié)核菌）是結(jié)核病的病因，結(jié)核菌能在巨噬細胞內(nèi)長期存活是其引起結(jié)核病的主要因素之一。研究證實，存活于巨噬細胞內(nèi)的結(jié)核菌能大量表達一種小分子熱休克蛋白Hsp16.3。Hsp16.3的大量表達引起結(jié)核菌細胞壁的明顯增厚。因此，推測Hsp16.3的表達有利于結(jié)核菌在巨噬細胞內(nèi)的存活。 Hsp16.3在天然狀態(tài)下是由三個三聚體組成的九聚體形式，Hsp16.3在體外最主要的功能就是其具有分子伴侶活性（molecular chaperone activity）。我們通過定點誘變其α-crystallin domain中的保守區(qū)域LPGV中的甘氨酸（Glycine G）為色氨酸（Tryptophan W），并結(jié)合Chaperone活性的檢測、ANS熒光探測、CD光譜技術、非變性孔徑梯度凝膠、FPLC以及內(nèi)源熒光檢測技術提出Hsp16.3九聚體的解聚是其發(fā)揮分子伴侶活性的前提，三聚體可能是其發(fā)揮分子伴侶活性的基本單位；同時，我們還認為，Hsp16.3的LPGV區(qū)位于其三聚體與三聚體的作用面。 通過將Hsp16.3與38k... 

【文章來源】：北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所北京市

【文章頁數(shù)】：133 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

Hsp16.3多克隆抗血清，esternblotting結(jié)果

混勻，100，C走出凝膠后，停止電泳，第三節(jié)結(jié)果.3和38kDa基因融合據(jù)HsP16.3蛋白和38kD左右。從15%SDS一PAGE4kDa左右，說明融合

融合蛋白可溶性分析巧%SDS一PAGE結(jié)果蛋白質(zhì)marker;B，C分別為含pETee28a--融合基因的(DE3)破碎的上清和沉淀;D，E分別為含pETse28a一38kDa的E3)破碎的上清和沉淀第四節(jié)討論腸桿菌中高效表達的結(jié)果往往形成包涵體(inclus原因是由于異源蛋白在宿主菌中過量表達(overp內(nèi)外許多學者為解決異源蛋白在大腸桿菌中的可包括低溫誘導以盡量降低目的蛋白的表達速度〔4.’在內(nèi)的折疊酶以及一些分子伴侶蛋白來幫助新的目的〔’8，’幻，但結(jié)果均不理想，說明包涵體的形。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]包涵體蛋白體外復性的研究進展[J]. 方敏,黃華樑.  生物工程學報. 2001(06)



本文編號：3497230