間充質(zhì)干細(xì)胞不僅具有多向分化潛能,還能靶向遷移到損傷部位、慢性炎癥部位及腫瘤部位,對(duì)于這些部位起到一定程度的修復(fù)作用。對(duì)于間充質(zhì)干細(xì)胞遷移機(jī)制的研究,有助于幫助我們理解并提高間充質(zhì)干細(xì)胞的“歸巢”能力,為自體修復(fù)和細(xì)胞治療提供理論依據(jù)。有文獻(xiàn)報(bào)道,炎癥因子TNF-α、IL-1β可以誘導(dǎo)問(wèn)充質(zhì)干細(xì)胞的遷移,但是具體的遷移機(jī)制尚不清楚。本研究首先利用50 ng/mLTNF-α和50 ng/mLIL-1β分別處理間充質(zhì)干細(xì)胞建立誘導(dǎo)細(xì)胞遷移模型。培養(yǎng)誘導(dǎo)72小時(shí)后,通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)和遷移小室實(shí)驗(yàn)證實(shí)TNF-α、IL-1β可以誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移。然后利用RT-PCR和Western Blot的方法檢測(cè)了MYL9和CYR61的表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn)MYL9和CYR61表達(dá)上調(diào)。進(jìn)一步用RT-PCR的方法檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2、MMP9以及其抑制劑TIMP1、 TIMP2的水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)MMP9mRNA水平明顯上調(diào)。Rho/MRTF-A信號(hào)通路廣泛參與細(xì)胞遷移過(guò)程,通過(guò)用10 μmol/L Rho信號(hào)通路的抑制劑Y27632對(duì)細(xì)胞預(yù)處理,然后誘導(dǎo)遷移,證明Rho信號(hào)通路的抑制降低了細(xì)胞的遷移能力。同時(shí)... 

【文章來(lái)源】：天津科技大學(xué)天津市

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１首次換液后原代ＭＳＣｓ?（ｌＯＯｘ）??巧ｇ．?３－１?Ｐｒｉｍａｒｙ?ＭＳＣｓ?ｃｈａｎｇｅｄ?ｍｅｄｉｕｍ?ｆｏｒ?化ｅｆｒｉｓｔ?ｔｉｍｅ?（１０〇ｘ）??

用顯微鏡拍照。用軟件ＩｍａｇｅＪ計(jì)數(shù)后，Ｗ對(duì)照組的迂移指數(shù)為１，根據(jù)；實(shí)??驗(yàn)組遷移指數(shù)＝（實(shí)驗(yàn)組遷移細(xì)胞數(shù)／實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞總數(shù)）／（對(duì)照組遷移細(xì)胞數(shù)／對(duì)照組??細(xì)胞總數(shù)），制成柱狀圖。結(jié)果如圖３－６所示。??■■??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＴＮＦ－ａ??（ａ）??３ｆｔ０ｒ??揉巧。．?Ｉ??移??密?２００．??１５。?■??■?Ｉ??ｏ＇?＾＾?ｉ??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＴＮＦ－ａ??（ｂ）??圖３－６?ＴＮＦ－ａ誘導(dǎo)ＭＳＣｓ遷移Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ實(shí)驗(yàn)（２０〇ｘ）臥及遷移指數(shù)??（ａ）?ＴＮＦ－ａ誘導(dǎo)ＭＳＣｓ遷移Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ實(shí)驗(yàn)（ｂ）遷移指數(shù)??Ｆｉｇ．?３－６?Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ?ａ巧巧?ａｎｄ?ｍｉｇｒａｔｉｏｎ?ｉｎｄｅｘ?ｉｎ?ＭＳＣｓ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ＴＮＦ＿ａ?（２０〇ｘ）??（ａ）?Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ?ａｓｓａｙ?ｉｎ?ＭＳＣｓ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｉ化?ＴＮＦ－ａ??（ｂ）?ｍｉｇｒａｔｉｏｎ?ｉｎｄｅｘ?ｉｎ?ＭＳＣｓ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｉｌ；ｈ?ＴＮＦ－ａ??從臥上圖中可看出，加入ＴＮＦ－ａ誘導(dǎo)可明顯使得間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移數(shù)目增??多，遷移指數(shù)升高，說(shuō)明ＴＮＦ－ａ確實(shí)可秀導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移。??３．２．２?ＴＮＦ－ａ誘導(dǎo)對(duì)于ＭＹＬ９、ＣＹ民６１表達(dá)的影口向??為了在分子水平上確定ＴＮＦ－ａ誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞遷移的作用

ＭＹＬ９的表達(dá)升高。因此，在本研究中，我們選用了?ＣＹＲ６１、ＭＹＬ９作為標(biāo)志物來(lái)檢??測(cè)細(xì)胞遷移能力的變化。??民Ｔ－ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖３－７和圖３－８所示。從圖中可Ｗ看到，經(jīng)??過(guò)ＴＮＦ－Ｕ誘導(dǎo)７２?ｈ后，ＣＹＲ６１、ＭＹＬ９在ｍＲＮＡ水平和蛋白水平表達(dá)量均有所升高。??說(shuō)明ＴＮＦ－ａ的誘導(dǎo)可Ｗ通過(guò)上調(diào)ＣＹＲ６Ｋ?ＭＹＬ９的表達(dá)來(lái)改變細(xì)胞骨架，增強(qiáng)細(xì)胞??的運(yùn)動(dòng)能力。??ＣＹＲ６１??ＭＹＬ９??ＧＡＰＤＨ??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＴＮＦ－ａ??圖３－７?ＴＮＦ－ａ誘導(dǎo)細(xì)胞迂移ｍａｒｋｅｒｓ的ｍＲＮＡ表達(dá)水平??Ｆｉｇ．?３－７?Ｔｈｅ?ｍＲＮＡ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?ｍ．ｉｇｒａｔｉｏｎ?ｍａｒｋｅｒｓ?ｉｎ?ＭＳＣｓ?化ｅａｔｅｄ?ｗｉ化?ＴＮＦ－ａ??ｍｙｌ．９｜制嘯嚇齡‘??ＣＹＲ６Ｊ?＇ｌｌ?麵ｉｉｉｉｙｉｕｉｉｉｉｉｉｒ??Ｐ－３．Ｃｔｉ?技斷細(xì)??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＴＮＦ－ａ??圖３－８?ＴＮＦ－ａ誘導(dǎo)細(xì)胞遷移ｍａｒｋｅｒｓ的蛋白表達(dá)水平?．??Ｆｉｇ．?３－８?Ｔｈｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?ｍｉ呂ｒａｔｉｏｎ?ｍａｒｋｅｒｓ?ｉｎ?ＭＳＣｓ?化ｅａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ＴＮＦ－ａ??３．２．３?ＴＮＦ－ａ誘導(dǎo)對(duì)于基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)的影口向??細(xì)胞遷移能力發(fā)生變化時(shí)通常伴隨細(xì)胞基質(zhì)環(huán)境的變化�；|(zhì)金屬蛋白酶??（ＭＭＰｓ）及其抑制劑（ＴＩＭＰｓ）在維持細(xì)胞的基質(zhì)環(huán)境中起著極其重要的作用�；�??質(zhì)金屬蛋白酶的主要生理作用就是降解細(xì)胞基質(zhì)，解除細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)障礙，其抑制劑在??正常的生理狀態(tài)下與基質(zhì)金屬蛋白酶Ｗ?１：１結(jié)合

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Hepatocyte Growth Factor Gene-modified Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells Transplantation Promotes Angiogenesis in a Rat Model of Hindlimb Ischemia[J]. 蘇冠華,孫雨霏,盧永昕,帥欣欣,廖玉華,劉啟云,韓俊,羅平.  Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2013(04)
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碩士論文
[1]臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞體外擴(kuò)增研究及其分泌細(xì)胞因子的高通量篩查[D]. 劉婷.中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2012



本文編號(hào)：3471489