目前我國人口結構老齡化程度開始加重，骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病率也隨之增長，已成為嚴重影響中老年健康的多發(fā)和常見疾病之一。中草藥淫羊藿（Epimedium grandiflorumMorr）具有補腎助陽、強筋健骨和祛風除濕的功能。其中，淫羊藿苷（Icariin, ICA）是淫羊藿中含量最為豐富的黃酮苷類化合物，具有顯著的抗骨質(zhì)疏松活性，但其作用機理尚不清楚。本實驗對大鼠骨髓基質(zhì)細胞（rBMSCs）和大鼠成骨細胞（OB）進行了研究，分別通過貼壁分離法和酶消化法分離獲得細胞并加以鑒定，待細胞鋪滿皿底后分為ICA組（1×10-5mol·L-1）、LY294002組（5×10-5mol·L-1）、ICA+LY294002組和空白對照組。不同藥物處理24h后分別利用Real-time PCR法檢測ALP、eNOS和iNOS的基因表達水平，用Western blot法檢測p-AKT、eNOS和iNOS蛋白表達量，同時測定總一氧化氮合酶（TNOS）活性、iNOS活性和NO生成量，對淫羊藿苷促進rBMSCs、OB成骨性分化的信號機理進行研究，以闡明淫羊藿苷的抗骨質(zhì)疏松機制，以及為開發(fā)和應用新型抗骨質(zhì)疏松藥物提供... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學甘肅省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Summary
英文縮略詞
第一章 文獻綜述
    1 骨質(zhì)疏松癥及其危害性
        1.1 骨質(zhì)疏松癥的分類
        1.2 骨質(zhì)疏松癥的危害性
        1.3 骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病機理
            1.3.1 性激素
            1.3.2 鈣調(diào)節(jié)激素
            1.3.3 皮質(zhì)類固醇激素
            1.3.4 生長激素
        1.4 國內(nèi)外骨質(zhì)疏松治療現(xiàn)狀
            1.4.1 雌激素
            1.4.2 降鈣素
            1.4.3 雙磷酸鹽
            1.4.4 氟化物
            1.4.5 植物雌激素
    2 淫羊藿研究進展
        2.1 淫羊藿的功能和主治
        2.2 淫羊藿苷的抗骨質(zhì)疏松作用
    3 成骨性分化的信號通路
        3.1 NO 與骨代謝
        3.2 PI3K/AKT 信號途徑與骨代謝
    5 本研究構想
第二章 大鼠骨髓基質(zhì)細胞的體外培養(yǎng)與鑒定
    1 實驗材料
    2 實驗方法
        2.1 大鼠骨髓基質(zhì)細胞的分離及培養(yǎng)
        2.2 大鼠骨髓基質(zhì)細胞的傳代培養(yǎng)
        2.3 大鼠大鼠髓基質(zhì)細胞的鑒定
            2.3.1 形態(tài)學觀察
            2.3.2 細胞表面抗原鑒定
            2.3.3 礦化結節(jié)染色法鑒定 BMSCs 的成骨性分化
                2.3.3.1 茜素紅染色
                2.3.3.2 Von kossa 改良法染色
    3 結果
        3.1 大鼠骨髓基質(zhì)細胞的形態(tài)
        3.2 大鼠骨髓基質(zhì)細胞表面抗原鑒定結果
        3.3 鈣化結節(jié)染色結果
    4 討論
第三章 大鼠成骨細胞的體外培養(yǎng)與鑒定
    1 材料
    2 方法
        2.1 大鼠成骨細胞的分離及原代培養(yǎng)
        2.2 大鼠成骨細胞的傳代培養(yǎng)
        2.3 大鼠成骨細胞的鑒定
            2.3.1 形態(tài)學觀察
            2.3.2 成骨細胞的成熟礦化檢測
    3 結果
        3.1 大鼠成骨細胞的形態(tài)
        3.2 鈣化結節(jié)染色結果
    4 討論
第四章 ICA 通過 PI3K/AKT-eNOS 通路促進 BMSCs 成骨性分化
    1 材料
    2 方法
        2.1 大鼠骨髓基質(zhì)細胞的分離培養(yǎng)及傳代
        2.2 成骨性誘導培養(yǎng)與藥物干預
        2.3 Real time PCR 法分析相關基因表達情況
        2.4 Western-blot 檢測蛋白表達
        2.5 總 NOS（TNOS）、iNOS 活性和 NO 生成量的測定
        2.6 統(tǒng)計學分析
    3 結果
        3.1 ICA 通過 PI3K/AKT 促進 rBMSCs 的成骨性分化
        3.2 PI3K/AKT 通過 eNOS 促進 rBMSCs 的成骨性分化
        3.3 ICA 通過 PI3K/AKT－eNOS 信號途徑促進 rBMSCs 的成骨性分化
    4 討論
第五章 ICA 通過 PI3K/AKT-eNOS 通路促進 OB 成骨性分化
    1 材料
    2 方法
        2.1 成骨基質(zhì)細胞的分離培養(yǎng)及傳代
        2.2 成骨性誘導培養(yǎng)與藥物干預
        2.3 Real time PCR 法分析相關基因表達情況
        2.4 Western-blot 檢測蛋白表達
        2.5 總 NOS（TNOS）、iNOS 活性和 NO 生成量的測定
        2.6 統(tǒng)計學分析
    3 結果
        3.1 ICA 通過 PI3K/AKT 促進 OB 的成骨性分化
        3.2 PI3K/AKT 通過 eNOS 促進 OB 的成骨性分化
        3.3 ICA 通過 PI3K/AKT－eNOS 信號途徑促進 OB 的成骨性分化
    4 討論
第六章 結論與展望
參考文獻
致謝
作者簡介
導師簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]淫羊藿苷通過OPG/RANKL信號途徑調(diào)節(jié)骨吸收的機理研究[J]. 馬小妮,葛寶豐,陳克明,周建,王嘉琪,郭曉宇,宋鵬,呂享,成魁.  中國骨質(zhì)疏松雜志. 2013(01)
[2]骨代謝分子信號通路研究進展[J]. 劉中天,尚靖.  亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥. 2012(06)
[3]淫羊藿苷與染料木黃酮對體外培養(yǎng)成骨細胞增殖及礦化成熟影響的對比研究[J]. 明磊國,陳克明,葛寶豐,馬慧萍,周建.  中國中藥雜志. 2011(16)
[4]8-異戊烯基柑橘素促進體外培養(yǎng)成骨細胞成熟礦化的研究[J]. 明磊國,陳克明,葛寶豐,翟遠坤.  生物化學與生物物理進展. 2011(05)
[5]骨形成過程中兩條重要的信號傳導通路[J]. 明磊國,陳克明.  中國骨質(zhì)疏松雜志. 2011(03)
[6]骨質(zhì)疏松癥的危害及預防[J]. 隋麗杰.  中國實用醫(yī)藥. 2010(32)
[7]全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞及其誘導分化[J]. 蔡鵬,朱紹興,蘇一鳴,黃世勇.  中國組織工程研究與臨床康復. 2009(36)
[8]骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化信號通路的研究進展[J]. 劉思景,郭偉韜,王輝.  現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志. 2009(14)
[9]淫羊藿苷對體外培養(yǎng)骨髓基質(zhì)干細胞成骨性分化的影響[J]. 陳克明,葛寶豐,馬慧萍,劉興炎,白孟海,馬麗萍,呂明波.  中國骨質(zhì)疏松雜志. 2008(09)
[10]淫羊藿苷對破骨細胞活性的影響[J]. 呂明波,劉興炎,葛寶豐,陳克明,白孟海,汪玉海,顧九君,馬麗萍.  中國骨傷. 2007(08)

碩士論文
[1]淫羊藿苷抗骨質(zhì)疏松分子機理研究[D]. 翟遠坤.蘭州理工大學 2011



本文編號：3470092