目的：本文主要目的在于研究心肌細胞系H9c2細胞中PARP-1與Twist-1相互作用調(diào)控microRNA199a/214轉(zhuǎn)錄表達的機制。方法及結(jié)果：我們應(yīng)用免疫共沉淀及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間相互作用的實驗方法證實在心肌細胞系H9c2細胞中Twist-1可以與PARP-1結(jié)合，并且Twist-1能被PARP-1多聚ADP核糖化修飾。應(yīng)用實時定量PCR的方法，我們檢測了H9c2細胞中microRNA-199a/214的表達情況，應(yīng)用凝膠遷移實驗我們研究了Twist-1的DNA結(jié)合能力，結(jié)果顯示：PARP抑制劑3AB或PJ34,或PARP-1siRNA能抑制H9c2細胞中Twist-1與DNA的結(jié)合，降低microRNA-199a/214的表達量。結(jié)論：在心肌細胞系H9c2細胞中PARP-1通過與Twist-1結(jié)合同時對其進行多聚ADP核糖化修飾促進了Twist-1的轉(zhuǎn)錄激活和其下游靶基因microRNA-199a/214表達。 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：39 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

免疫共沉淀實驗結(jié)果：將培養(yǎng)的心肌細胞系H9c2細胞核抽提物分別與抗PARP-1抗體，抗PAR抗體，非特異性IgG抗體加入ProteinA-Sepharosebeads后各自共孵育，

圖4重組純蛋白Westernblot結(jié)果

凝膠遷移實驗結(jié)果：A:在培養(yǎng)的心肌細胞系H9c2細胞中，轉(zhuǎn)染PARP-1siRNA后，Twist-1DNA結(jié)合力檢測結(jié)果


本文編號：3462625