基于猴病毒40（SV40）載體在COS7細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制沒(méi)有節(jié)制并對(duì)細(xì)胞具有致死性,長(zhǎng)期以來(lái)SV40載體-COS7系統(tǒng)只被用作瞬時(shí)表達(dá)。本研究的最初設(shè)想是通過(guò)在SV40載體的復(fù)制中引入負(fù)反饋機(jī)制,而使載體能在COS7細(xì)胞進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)。pctPA是實(shí)驗(yàn)中作為對(duì)照的重組質(zhì)粒,該質(zhì)粒是含SV40復(fù)制起始點(diǎn)（ori）_、t-PA（人組織型纖溶酶原激活劑）基因和新霉素篩選基因的SV40載體。鑒于pctPA的復(fù)制失控潛能,我們推測(cè)其難以在COS7細(xì)胞內(nèi)建立穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染。但結(jié)果與預(yù)期的相反,COS7細(xì)胞轉(zhuǎn)染pctPA并以G418篩選4周后,長(zhǎng)出多個(gè)形態(tài)與正常COS7細(xì)胞相似的抗性克隆。Southern Blot分析顯示,在穩(wěn)定的COS7抗性細(xì)胞中,質(zhì)粒pctPA以染色體外附加體的形式存在,平均每細(xì)胞約含300個(gè)拷貝。提示載體在COS7細(xì)胞中的復(fù)制受到反式抑制。在COS7抗性細(xì)胞的培養(yǎng)液上清中,溶圈實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到t-PA的表達(dá),其表達(dá)量約為1.1μg/10⁶細(xì)胞/天,與質(zhì)粒pctPA在COS7作瞬時(shí)表達(dá)時(shí)（轉(zhuǎn)染后48h）的水平相近。但在細(xì)胞傳代中無(wú)G418壓力時(shí),t-P... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍軍事科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：104 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
重組質(zhì)粒索引
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
第二部分
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
第三部分
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
致謝



本文編號(hào)：3461286