目的:利用昆蟲-桿狀表達(dá)系統(tǒng)建立表達(dá)和純化分泌形式的水痘-帶狀皰疹病毒（varicellazoster virus,VZV）糖蛋白gE的方法,并鑒定其理化性質(zhì)及免疫原性。方法:利用Gibson assembly同源重組試劑盒快速構(gòu)建重組質(zhì)粒pFastbac-VZV gE。在sf9昆蟲細(xì)胞中鑒定序列優(yōu)化前后表達(dá)量的差異,并在High FiveTM細(xì)胞中大量表達(dá)。通過Ni-NTA親和層析方法得到高純度gE蛋白,之后通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等驗(yàn)證了其理化性質(zhì),并進(jìn)行小鼠免疫分析其免疫原性。結(jié)果:構(gòu)建了pFastbac-VZV g E1/2重組質(zhì)粒,經(jīng)過PCR及雙酶切鑒定后均為陽性克隆。使用BAC/PAC試劑盒提取Bacmid轉(zhuǎn)染sf9細(xì)胞制備桿狀病毒,經(jīng)Western blot檢測(cè),sf9細(xì)胞開始表達(dá)gE蛋白且隨著病毒代次升高g E蛋白表達(dá)量增加。序列優(yōu)化后表達(dá)量明顯增加,但是大部分以胞內(nèi)形式存在。通過Ni-NTA一步親和層析獲得純度較高的gE蛋白,并與VZV單抗9C8具有較好的反應(yīng)性。通過免疫小鼠產(chǎn)生高滴度抗體,且免疫熒光結(jié)果顯示其血清可以與天然病毒上的gE抗原結(jié)合。結(jié)論:成功獲得了桿狀表達(dá)系... 

【文章來源】：中國生物工程雜志. 2019,39(08)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 質(zhì)粒、細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.1.2 試劑
    1.2 方法
        1.2.1 Gibson同源重組
        1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        1.2.3 蛋白質(zhì)表達(dá)純化
        1.2.4 免疫印跡實(shí)驗(yàn) (Western blot)
        1.2.5 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
        1.2.6 小鼠免疫
        1.2.7 免疫熒光實(shí)驗(yàn)
2 結(jié)果
    2.1 重組質(zhì)粒p Fastbac-VZV gE1/2構(gòu)建及鑒定
    2.2 桿狀表達(dá)VZV gE蛋白的制備
    2.3 VZV gE蛋白的性質(zhì)鑒定
    2.4 VZV gE蛋白的免疫原性分析
3 討論



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