背景:LIM礦化蛋白1及低氧誘導因子1α作為胞內(nèi)蛋白,可分別從誘導成骨分化及促進血管再生兩個方面促進成骨,聯(lián)合二者高效誘導脂肪源性干細胞成骨分化具有重要的意義。目的:探討慢病毒載體介導的LIM礦化蛋白1及低氧誘導因子1α雙基因轉(zhuǎn)染的脂肪源性干細胞成骨分化的情況。方法:應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)克隆目的基因LIM礦化蛋白1及低氧誘導因子1α片段,并分別克隆于慢病毒骨架質(zhì)粒p LVX-EF1α-DsR ed-Hyg和p LVX-EF1α-IRES2-AcG FP1中,構(gòu)建慢病毒載體主體質(zhì)粒p LVX-EF1α-DsR ed-Hyg-RLMP-1和p LVX-EF1α-AcG FP-RHIF-1α,隨即與輔助質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染Lenti-X 293T細胞,包裝慢病毒載體;采用組織塊加酶消化法分離培養(yǎng)大鼠脂肪源性干細胞,使用流式細胞儀對其進行鑒定。分別在慢病毒轉(zhuǎn)染脂肪源性干細胞3,7,14 d后,應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄PCR方法檢測脂肪源性干細胞中成骨基因骨形態(tài)發(fā)生蛋白2、Runx-2、堿性磷酸酶、骨鈣蛋白表達水平的同時檢測血管內(nèi)皮生長因子的表達水平。結(jié)果與結(jié)論:pL VX-EF1α-DsR ed-Hyg-R... 

【文章來源】：中國組織工程研究. 2015,19(32)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
0引言Introduction
1 材料和方法Materials and methods
2 結(jié)果Results
    2.1 脂肪源性干細胞的鑒定
        2.1.1 脂肪源性干細胞的形態(tài)
        2.1.2 脂肪源性干細胞的表面標記物
    2.2 慢病毒表達載體的構(gòu)建
    2.3 慢病毒對大鼠脂肪源性干細胞的最佳轉(zhuǎn)染效率
    2.4轉(zhuǎn)染后細胞的生長曲線
    2.5目的基因檢測
    2.6 脂肪源性干細胞中成骨基因的表達
3 討論Discussion


【參考文獻】：
期刊論文
[1]突變型低氧誘導因子1α加速骨缺損部位新血管生成的實驗觀察[J]. 王皓,李諶,郜玉忠.  西安交通大學學報(醫(yī)學版). 2015(04)
[2]Recent advances in bone regeneration using adult stem cells[J]. Hadar Zigdon-Giladi,Utai Rudich,Gal Michaeli Geller,Ayelet Evron.  World Journal of Stem Cells. 2015(03)
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[7]不同部位脂肪源性干細胞的生物學特性比較[J]. 林立新,黃勇,王玉婷,王鵬,王學明,姜蕾,林冠妤.  中國組織工程研究. 2013(27)
[8]LIM礦化蛋白1促進成骨的研究現(xiàn)狀[J]. 劉會文,羅嘉全,韓智敏,曹凱.  中國骨與關(guān)節(jié)外科. 2011(04)

博士論文
[1]轉(zhuǎn)染LMP-1基因人脂肪間充質(zhì)干細胞與退變髓核細胞體外雙層細胞微球三維條件下共培養(yǎng)的實驗研究[D]. 李雪峰.蘇州大學 2012
[2]具有成骨誘導活性的新型融合蛋白的實驗研究[D]. 張大偉.第四軍醫(yī)大學 2007



本文編號：3451990