背景:LIM礦化蛋白1及低氧誘導(dǎo)因子1α作為胞內(nèi)蛋白,可分別從誘導(dǎo)成骨分化及促進(jìn)血管再生兩個(gè)方面促進(jìn)成骨,聯(lián)合二者高效誘導(dǎo)脂肪源性干細(xì)胞成骨分化具有重要的意義。目的:探討慢病毒載體介導(dǎo)的LIM礦化蛋白1及低氧誘導(dǎo)因子1α雙基因轉(zhuǎn)染的脂肪源性干細(xì)胞成骨分化的情況。方法:應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)克隆目的基因LIM礦化蛋白1及低氧誘導(dǎo)因子1α片段,并分別克隆于慢病毒骨架質(zhì)粒p LVX-EF1α-DsR ed-Hyg和p LVX-EF1α-IRES2-AcG FP1中,構(gòu)建慢病毒載體主體質(zhì)粒p LVX-EF1α-DsR ed-Hyg-RLMP-1和p LVX-EF1α-AcG FP-RHIF-1α,隨即與輔助質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染Lenti-X 293T細(xì)胞,包裝慢病毒載體;采用組織塊加酶消化法分離培養(yǎng)大鼠脂肪源性干細(xì)胞,使用流式細(xì)胞儀對(duì)其進(jìn)行鑒定。分別在慢病毒轉(zhuǎn)染脂肪源性干細(xì)胞3,7,14 d后,應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄PCR方法檢測(cè)脂肪源性干細(xì)胞中成骨基因骨形態(tài)發(fā)生蛋白2、Runx-2、堿性磷酸酶、骨鈣蛋白表達(dá)水平的同時(shí)檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)水平。結(jié)果與結(jié)論:pL VX-EF1α-DsR ed-Hyg-R... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)組織工程研究. 2015,19(32)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【文章目錄】：
0引言Introduction
1 材料和方法Materials and methods
2 結(jié)果Results
    2.1 脂肪源性干細(xì)胞的鑒定
        2.1.1 脂肪源性干細(xì)胞的形態(tài)
        2.1.2 脂肪源性干細(xì)胞的表面標(biāo)記物
    2.2 慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.3 慢病毒對(duì)大鼠脂肪源性干細(xì)胞的最佳轉(zhuǎn)染效率
    2.4轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線
    2.5目的基因檢測(cè)
    2.6 脂肪源性干細(xì)胞中成骨基因的表達(dá)
3 討論Discussion


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]突變型低氧誘導(dǎo)因子1α加速骨缺損部位新血管生成的實(shí)驗(yàn)觀察[J]. 王皓,李諶,郜玉忠.  西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2015(04)
[2]Recent advances in bone regeneration using adult stem cells[J]. Hadar Zigdon-Giladi,Utai Rudich,Gal Michaeli Geller,Ayelet Evron.  World Journal of Stem Cells. 2015(03)
[3]低氧誘導(dǎo)因子-1α參與骨發(fā)育及骨代謝調(diào)控的研究進(jìn)展[J]. 邵進(jìn),張巖,王治,楊鐵毅.  中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志. 2015(03)
[4]攜帶低氧誘導(dǎo)因子1α慢病毒感染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后成骨基因的表達(dá)[J]. 付志杰,張巨峰,王大平,陳潔琳,段莉,何美建,李慶慶,李文翠,熊建義.  中國(guó)組織工程研究. 2014(28)
[5]LMP-1基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的LIM礦化蛋白表達(dá)[J]. 金夏生,王子江,向川.  中國(guó)組織工程研究. 2014(23)
[6]LMP-1基因慢病毒重組體對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖影響及其表達(dá)[J]. 梁長(zhǎng)生,向川,魏增永,侯慧銘,秦迎澤,衛(wèi)小春.  中國(guó)骨傷. 2013(12)
[7]不同部位脂肪源性干細(xì)胞的生物學(xué)特性比較[J]. 林立新,黃勇,王玉婷,王鵬,王學(xué)明,姜蕾,林冠妤.  中國(guó)組織工程研究. 2013(27)
[8]LIM礦化蛋白1促進(jìn)成骨的研究現(xiàn)狀[J]. 劉會(huì)文,羅嘉全,韓智敏,曹凱.  中國(guó)骨與關(guān)節(jié)外科. 2011(04)

博士論文
[1]轉(zhuǎn)染LMP-1基因人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞與退變髓核細(xì)胞體外雙層細(xì)胞微球三維條件下共培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 李雪峰.蘇州大學(xué) 2012
[2]具有成骨誘導(dǎo)活性的新型融合蛋白的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 張大偉.第四軍醫(yī)大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3451990