目的研究miR-124靶向鎂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1（MagT1）可否調(diào)控活化后T細(xì)胞功能耗竭。方法 1)分離外周血單個核細(xì)胞,用IFN-γ、IL-2、抗-CD3抗體、抗-CD28抗體和IL-1α活化T細(xì)胞;流式細(xì)胞儀檢測T細(xì)胞活化標(biāo)記分子CD25和CD69所占的比例。2)構(gòu)建miR-124/miR-124 sponge慢病毒載體;包裝慢病毒后感染活化T細(xì)胞,用RT-qPCR檢測感染后T細(xì)胞內(nèi)miR-124和MagT1基因表達(dá)。3)生物信息學(xué)分析miR-124與MagT1的靶向位點,并用雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)鑒定。4)Western blot法檢測慢病毒感染前后T細(xì)胞MagT1和PD-1蛋白水平。5)CCK8法檢測慢病毒感染前后T細(xì)胞增殖能力;ELISA法檢測細(xì)胞T分泌細(xì)胞因子TNF-α和TGF-β的能力。結(jié)果流式細(xì)胞儀檢測表明T細(xì)胞活化成功。RT-qPCR檢測表明慢病毒構(gòu)建成功,miR-124/miR-124 sponge載體分別顯著上調(diào)或下調(diào)miR-124的表達(dá)（P<0.01）。雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)證實miR-124靶向MagT1 3′UTR并抑制其表達(dá)。Western blot表明mi... 

【文章來源】：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2019,39(10)CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 外周血單核細(xì)胞分離與T細(xì)胞的活化:
        1.2.2 流式細(xì)胞儀檢測T細(xì)胞的活化:
        1.2.3 慢病毒構(gòu)建和感染:
        1.2.4 RT-qPCR檢測感染后T細(xì)胞內(nèi)miR-124表達(dá)水平:
        1.2.5 雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng):
        1.2.6 Western blot檢測PD-1和MAGT1蛋白表達(dá)水平:
        1.2.7 CCK8法檢測各組T細(xì)胞增殖能力:
        1.2.8 ELISA法檢測各組T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子TNF-α和TGF-β的能力:
    1.3 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 T細(xì)胞活化
    2.2 miR-124過表達(dá)和miR-124 sponge慢病毒感染后miR-124和MagT1 mRNA表達(dá)
    2.3 miR-124過表達(dá)和miR-124 sponge慢病毒感染后檢測活化后T細(xì)胞增殖能力
    2.4 檢測各組T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子TNF-α和TGF-β的能力
    2.5 miR-124靶向MagT1 3′UTR調(diào)控MagT1基因
    2.6 miR-124調(diào)控MagT1蛋白表達(dá)及對耗竭性T細(xì)胞生物標(biāo)志蛋白PD-1的影響
3 討論



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