人類免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus, HIV）歸屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科中慢病毒屬,主要經(jīng)血液、性接觸及母嬰垂直途徑等傳播,可引起獲得性免疫缺陷綜合癥（Acquired Immune Deficiency Syndrome, AIDS）,即艾滋病。目前,艾滋病感染已經(jīng)成為全球所面臨的重大公共衛(wèi)生問題。研制有效的HIV疫苗是艾滋病防治的重要手段之一。因此,探索HIV疫苗研究的新策略和尋找新的疫苗靶點對疫苗的成功研發(fā)顯得尤為重要。HIV-1反式激活蛋白Trans-activator of transcription, Tat)是HIV感染早期產(chǎn)生的一種重要調(diào)控蛋白,在HIV-1的復(fù)制、擴散和致病中起重要作用。HIV-1感染靶細胞后,胞質(zhì)中合成的Tat轉(zhuǎn)移到核內(nèi),與多種轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子結(jié)合組成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合體（transcription initiation complex, TIC）,促進病毒RNA的轉(zhuǎn)錄、延伸和病毒復(fù)制。此外,Tat還可被感染細胞通過多種方式分泌到胞外發(fā)揮“病毒毒素”的作用：①通過誘導(dǎo)CD4+T細胞、NK細胞或B細胞的凋亡,發(fā)揮其免疫抑制的作用；... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Tat蛋白結(jié)構(gòu)

1.6.1HIV-lta七8_6:擴增區(qū)段確定根據(jù)Tat結(jié)構(gòu)特點將其序列分為五個功能區(qū)段，Tat38_61將包含其中的38一48aa、49一6laa兩個功能區(qū)段，見圖1一3。司d沁C羚te叭一巧。h偽治b。舀沁Znde減On月....馨粼{攀蘸加..1嘟黝....日翻加即加....2分它 2323日鄧日碑夕575母幾考入夕習(xí)份蘿O了38一61aa圖1一 3Tat38_61功能區(qū)段 1.6.2HIV-ltat3，一6.引物設(shè)計根據(jù) HIV-1HXBZ株Tat氨基酸序列(GenBank:AAN7382O.l)以及大腸桿菌偏好密碼子，設(shè)計2條引物，委托上海生工生物技術(shù)有限公司合成。引物采用Primers.0軟件分析評價，5’端引入BamHI酶切位點，3’端引入 Hind111酶切位點。構(gòu)建HIV-ltat38一6:的引物序列見表1一1。

.6:的序列分析定陽性的單克隆分子進行序列測定，測序結(jié)果列與標(biāo)準(zhǔn)HIV-1HXBZ株tat38一l氨基酸序列完命名為pMD18一T-tat38一61。ACC.AAA.GCT.CTG.GGT.ATC.TCT.TAC.GGT.CGT.一R一G一Y一S一工一G一L一A一K一T.CAC.CAG.AACHQN611一6體外合成Hry-1HxBZ株tat38-6:序列及相對應(yīng)二1原核表達質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定正確的pMD18一T-tatss-61PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)Bam表達載體pET32a連接，轉(zhuǎn)化后陽性克隆抽質(zhì)可見大小分別為5900bp(載體片段)和75bP

【參考文獻】：
期刊論文
[1]HIV-1 Tat蛋白的生物學(xué)特性及其致病效應(yīng)[J]. 滕競飛,潘衛(wèi).  中國生物制品學(xué)雜志. 2009(04)
[2]Tat蛋白結(jié)構(gòu)與功能的研究進展[J]. 艾菁,王麗梅,夏威,耿美玉.  細胞與分子免疫學(xué)雜志. 2005(S1)



本文編號：3415619