目的探索一種從人中鼻甲分離培養(yǎng)嗅鞘細胞的方法并鑒定所獲得的細胞。方?法通過手術(shù)獲取人中鼻甲黏膜組織,隨后進行兩步消化并剝離黏膜上皮組織,得到體積較小的組織塊,再進行組織塊原代（傳代）培養(yǎng)并加壓篩選,最終得到雙極或多極樣細胞并對獲得的細胞進行免疫熒光鑒定。上皮樣細胞比例、S100β和p75陽性細胞比例用x±s表示,組間比較采用獨立樣本t檢驗。結(jié)果將不剝離上皮層與剝離上皮層培養(yǎng)的原代細胞中上皮樣細胞的比例進行對比,發(fā)現(xiàn)上皮層組上皮樣細胞比例為（92.23±3.93）﹪高于剝離上皮層組上皮樣細胞的比例（77.63±2.97）﹪,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=5.129,P=0.007）。采用剝離上皮層法培養(yǎng)原代細胞,經(jīng)過加壓篩選的細胞呈現(xiàn)雙極或多極樣,符合嗅鞘細胞形態(tài)學(xué)特點。免疫熒光染色發(fā)現(xiàn),S100β陽性細胞占總細胞量的（8.1±1.7）﹪,而p75陽性細胞占總細胞量的5﹪以下,達到國內(nèi)外研究同等水平。結(jié)論通過使用兩步消化法和加壓篩選聯(lián)合的方法從人中鼻甲粘膜組織中成功獲得了人中鼻甲嗅鞘細胞,相比較傳統(tǒng)方法,細胞分離培養(yǎng)周期明顯縮短。 

【文章來源】：中華細胞與干細胞雜志(電子版). 2019,9(05)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

光鏡下觀察培養(yǎng)7d的原代細胞（×100）

取樣本，采用不剝離上皮層直接消化、剪碎并培養(yǎng)7d后獲得的原代細胞中上皮樣細胞比例較高（圖1b）。分別選取3例剝離上皮層與不剝離上皮層的鼻黏膜原代培養(yǎng)7d后的細胞進行比較。每例樣本鏡下隨機選擇5個視野，統(tǒng)計上皮樣細胞所占比例的平均值作為該例樣本原代細胞中上皮樣細胞的比值。將不剝離上皮層的原代細胞定義為上皮層組，剝離上皮層的原代細胞定義為剝離上皮層組。上皮層組中上皮樣細胞比例為（92.23±3.93）﹪，剝離上皮層組中上皮樣細胞比例為（77.63±2.97）﹪，兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=5.129，P=0.007，圖2）。二、細胞加壓篩選使用消化酶對原代細胞進行短時間消化（1~2min），以成纖維樣細胞皺縮而上皮樣細胞未出現(xiàn)明顯變化為宜，以此獲得純度較高的成纖維樣細胞。隨后對收獲的成纖維樣細胞進行傳代培養(yǎng)，待第1次傳代培養(yǎng)的細胞融合度達到50﹪后進行Arb-C加壓篩眩篩選后1~2d可見大量細胞死亡，細胞密度降低（圖3）。三、細胞免疫熒光鑒定當(dāng)篩選后的第1代細胞融合度達到80﹪后，取部分細胞接種于細胞爬片上進行免疫熒光鑒注：a圖中心區(qū)域有成纖維樣細胞遷出，四周區(qū)域有部分上皮樣細胞；b圖僅見上皮樣細胞而無成纖維樣細胞遷出圖1光鏡下觀察培養(yǎng)7d的原代細胞（×100）圖2原代細胞中上皮樣細胞比例對比注：傳代細胞呈雙極/多極樣，符合嗅鞘細胞形態(tài)學(xué)特征圖3光鏡下觀察加壓篩選2d后的傳代細胞（×100）

ㄒ邐?掀げ闋椋?剝離上皮層的原代細胞定義為剝離上皮層組。上皮層組中上皮樣細胞比例為（92.23±3.93）﹪，剝離上皮層組中上皮樣細胞比例為（77.63±2.97）﹪，兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=5.129，P=0.007，圖2）。二、細胞加壓篩選使用消化酶對原代細胞進行短時間消化（1~2min），以成纖維樣細胞皺縮而上皮樣細胞未出現(xiàn)明顯變化為宜，以此獲得純度較高的成纖維樣細胞。隨后對收獲的成纖維樣細胞進行傳代培養(yǎng)，待第1次傳代培養(yǎng)的細胞融合度達到50﹪后進行Arb-C加壓篩眩篩選后1~2d可見大量細胞死亡，細胞密度降低（圖3）。三、細胞免疫熒光鑒定當(dāng)篩選后的第1代細胞融合度達到80﹪后，取部分細胞接種于細胞爬片上進行免疫熒光鑒注：a圖中心區(qū)域有成纖維樣細胞遷出，四周區(qū)域有部分上皮樣細胞；b圖僅見上皮樣細胞而無成纖維樣細胞遷出圖1光鏡下觀察培養(yǎng)7d的原代細胞（×100）圖2原代細胞中上皮樣細胞比例對比注：傳代細胞呈雙極/多極樣，符合嗅鞘細胞形態(tài)學(xué)特征圖3光鏡下觀察加壓篩選2d后的傳代細胞（×100）

【參考文獻】：
期刊論文
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