目的探索一種從人中鼻甲分離培養(yǎng)嗅鞘細(xì)胞的方法并鑒定所獲得的細(xì)胞。方?法通過手術(shù)獲取人中鼻甲黏膜組織,隨后進(jìn)行兩步消化并剝離黏膜上皮組織,得到體積較小的組織塊,再進(jìn)行組織塊原代（傳代）培養(yǎng)并加壓篩選,最終得到雙極或多極樣細(xì)胞并對獲得的細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光鑒定。上皮樣細(xì)胞比例、S100β和p75陽性細(xì)胞比例用x±s表示,組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。結(jié)果將不剝離上皮層與剝離上皮層培養(yǎng)的原代細(xì)胞中上皮樣細(xì)胞的比例進(jìn)行對比,發(fā)現(xiàn)上皮層組上皮樣細(xì)胞比例為（92.23±3.93）﹪高于剝離上皮層組上皮樣細(xì)胞的比例（77.63±2.97）﹪,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=5.129,P=0.007）。采用剝離上皮層法培養(yǎng)原代細(xì)胞,經(jīng)過加壓篩選的細(xì)胞呈現(xiàn)雙極或多極樣,符合嗅鞘細(xì)胞形態(tài)學(xué)特點(diǎn)。免疫熒光染色發(fā)現(xiàn),S100β陽性細(xì)胞占總細(xì)胞量的（8.1±1.7）﹪,而p75陽性細(xì)胞占總細(xì)胞量的5﹪以下,達(dá)到國內(nèi)外研究同等水平。結(jié)論通過使用兩步消化法和加壓篩選聯(lián)合的方法從人中鼻甲粘膜組織中成功獲得了人中鼻甲嗅鞘細(xì)胞,相比較傳統(tǒng)方法,細(xì)胞分離培養(yǎng)周期明顯縮短。 

【文章來源】：中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志(電子版). 2019,9(05)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

光鏡下觀察培養(yǎng)7d的原代細(xì)胞（×100）

取樣本，采用不剝離上皮層直接消化、剪碎并培養(yǎng)7d后獲得的原代細(xì)胞中上皮樣細(xì)胞比例較高（圖1b）。分別選取3例剝離上皮層與不剝離上皮層的鼻黏膜原代培養(yǎng)7d后的細(xì)胞進(jìn)行比較。每例樣本鏡下隨機(jī)選擇5個視野，統(tǒng)計上皮樣細(xì)胞所占比例的平均值作為該例樣本原代細(xì)胞中上皮樣細(xì)胞的比值。將不剝離上皮層的原代細(xì)胞定義為上皮層組，剝離上皮層的原代細(xì)胞定義為剝離上皮層組。上皮層組中上皮樣細(xì)胞比例為（92.23±3.93）﹪，剝離上皮層組中上皮樣細(xì)胞比例為（77.63±2.97）﹪，兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=5.129，P=0.007，圖2）。二、細(xì)胞加壓篩選使用消化酶對原代細(xì)胞進(jìn)行短時間消化（1~2min），以成纖維樣細(xì)胞皺縮而上皮樣細(xì)胞未出現(xiàn)明顯變化為宜，以此獲得純度較高的成纖維樣細(xì)胞。隨后對收獲的成纖維樣細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)，待第1次傳代培養(yǎng)的細(xì)胞融合度達(dá)到50﹪后進(jìn)行Arb-C加壓篩眩篩選后1~2d可見大量細(xì)胞死亡，細(xì)胞密度降低（圖3）。三、細(xì)胞免疫熒光鑒定當(dāng)篩選后的第1代細(xì)胞融合度達(dá)到80﹪后，取部分細(xì)胞接種于細(xì)胞爬片上進(jìn)行免疫熒光鑒注：a圖中心區(qū)域有成纖維樣細(xì)胞遷出，四周區(qū)域有部分上皮樣細(xì)胞；b圖僅見上皮樣細(xì)胞而無成纖維樣細(xì)胞遷出圖1光鏡下觀察培養(yǎng)7d的原代細(xì)胞（×100）圖2原代細(xì)胞中上皮樣細(xì)胞比例對比注：傳代細(xì)胞呈雙極/多極樣，符合嗅鞘細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征圖3光鏡下觀察加壓篩選2d后的傳代細(xì)胞（×100）

ㄒ邐?掀げ闋椋?剝離上皮層的原代細(xì)胞定義為剝離上皮層組。上皮層組中上皮樣細(xì)胞比例為（92.23±3.93）﹪，剝離上皮層組中上皮樣細(xì)胞比例為（77.63±2.97）﹪，兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=5.129，P=0.007，圖2）。二、細(xì)胞加壓篩選使用消化酶對原代細(xì)胞進(jìn)行短時間消化（1~2min），以成纖維樣細(xì)胞皺縮而上皮樣細(xì)胞未出現(xiàn)明顯變化為宜，以此獲得純度較高的成纖維樣細(xì)胞。隨后對收獲的成纖維樣細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)，待第1次傳代培養(yǎng)的細(xì)胞融合度達(dá)到50﹪后進(jìn)行Arb-C加壓篩眩篩選后1~2d可見大量細(xì)胞死亡，細(xì)胞密度降低（圖3）。三、細(xì)胞免疫熒光鑒定當(dāng)篩選后的第1代細(xì)胞融合度達(dá)到80﹪后，取部分細(xì)胞接種于細(xì)胞爬片上進(jìn)行免疫熒光鑒注：a圖中心區(qū)域有成纖維樣細(xì)胞遷出，四周區(qū)域有部分上皮樣細(xì)胞；b圖僅見上皮樣細(xì)胞而無成纖維樣細(xì)胞遷出圖1光鏡下觀察培養(yǎng)7d的原代細(xì)胞（×100）圖2原代細(xì)胞中上皮樣細(xì)胞比例對比注：傳代細(xì)胞呈雙極/多極樣，符合嗅鞘細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征圖3光鏡下觀察加壓篩選2d后的傳代細(xì)胞（×100）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]成人鼻腔嗅區(qū)黏膜細(xì)胞的分離培養(yǎng)與免疫學(xué)特點(diǎn)[J]. 王洪美,任玉水,田國忠,姜曉榮,曹敬麗,劉婧媛,周長滿,黃紅云.  解剖學(xué)報. 2010 (03)
[2]人鼻腔嗅粘膜嗅鞘細(xì)胞的原代培養(yǎng)和免疫組化觀察[J]. 常瑞,梅強(qiáng),陰小龍,程延.  生物骨科材料與臨床研究. 2008(04)
[3]人血清及神經(jīng)生長因子對成人鼻黏膜嗅鞘細(xì)胞體外增殖的影響[J]. 張志強(qiáng),沈鐵城,黃永輝,黃秋生,楊勇,龔愛華,張志堅.  江蘇大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2007(01)
[4]Influence of patients’ age on functional recovery after transplantation of olfactory ensheathing cells into injured spinal cord injury[J]. 黃紅云,陳琳,王洪美,修波,李炳辰,王銳,張健,張峰,顧征,李熒,宋英倫,郝偉,潘樹義,孫君昭.  Chinese Medical Journal. 2003(10)



本文編號：3413521