本文關鍵詞：幽門螺桿菌感應蛋白CrdS的原核表達及其在酸適應調(diào)控中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：原核表達并純化幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,H.pylori)CrdRS信號傳導系統(tǒng)中的感應蛋白CrdS，并進行生物信息學分析，通過體外酸環(huán)境培養(yǎng)實驗，探討其在H.pylori酸適應調(diào)控中的作用。 方法：提取H.pylori26695標準株全基因組DNA,以此為模版，，PCR擴增編碼CrdS蛋白的基因hp1364；構建重組克隆質粒pUCm-T-hp1364和原核表達質粒pQE30-hp1364，經(jīng)PCR、雙酶切和測序鑒定后，轉化大腸埃希菌XL1blue，IPTG誘導表達目標蛋白；通過SDS-PAGE分析，Western blot鑒定表達蛋白,并對CrdS蛋白進行生物信息學分析。用純化后的重組蛋白CrdS免疫家兔獲得其免疫血清。通過體外在不同pH值的培養(yǎng)基中加入含抗CrdS的免疫血清培養(yǎng)H.pylori實驗，初步探討CrdS在H.pylori酸適應調(diào)控中的作用。 結果：以提取的H.pylori基因組DNA為模板，PCR擴增hp1364基因，擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析，可見在1200bp處有一明顯條帶，與hp1364基因的分子量大小相符。重組克隆質粒pUCm-T-hp1364和原核表達質粒pQE30-hp1364經(jīng)BamHⅠ/HindIII雙酶切后，瓊脂糖凝膠電泳分析可見約1200bp處有明顯條帶；測序后，經(jīng)NCBI BLAST在線比對所測序列與hp1364基因序列完全相符。誘導表達的目標蛋白經(jīng)SDS-PAGE分析，相對分子量約為46kDa，主要以包涵體形式存在。Western blot鑒定表明表達蛋白確為目標蛋白。生物信息學分析CrdS的核酸和氨基酸序列與其它H.pylori菌株比較具有極高的同源性，表面有許多親水性區(qū)域，含有多種容易被磷酸化的氨基酸。免疫家兔后獲得該重組蛋白的免疫血清，H.pylori酸環(huán)境培養(yǎng)實驗表明CrdS能夠影響H.pylori的生長。 結論：成功構建了重組克隆質粒pUCm-T-hp1364和原核表達質粒pQE30-hp1364，原核表達了H.pylori CrdS蛋白。初步證明該蛋白參與了H.pylori酸適應調(diào)控，為深入探討H.pylori酸適應調(diào)控機制和新的抗H.pylori感染的途徑提供了實驗材料和依據(jù)。
【關鍵詞】：幽門螺桿菌 CrdS 原核表達 酸適應 調(diào)控
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R378.2
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-13
• 第一部分 幽門螺桿菌感應蛋白 CrdS 的原核表達及生物信息學分析13-37
• 1 材料與方法13-28
• 2 結果28-35
• 3 討論35-37
• 第二部分 幽門螺桿菌感應蛋白 CrdS 在酸適應調(diào)控中的作用37-43
• 1 材料與方法37-40
• 2 結果40-41
• 3 討論41-43
• 全文總結43-44
• 參考文獻44-46
• 文獻綜述46-54
• 參考文獻51-54
• 致謝54-55
• 攻讀碩士研究生期間發(fā)表的論文及參加的學術會議55-56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 秦智強;瞿滌;;細菌雙組分信號轉導系統(tǒng)[J];國外醫(yī)學(微生物學分冊);2003年05期

2 郝艷華;張維;陳明;;細菌雙組分系統(tǒng)的研究進展[J];中國農(nóng)業(yè)科技導報;2012年02期

  本文關鍵詞：幽門螺桿菌感應蛋白CrdS的原核表達及其在酸適應調(diào)控中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：336829