紅血球的生成,是造血干細(xì)胞定向往紅細(xì)胞發(fā)育,成熟的過程,是一個連續(xù)而又具有階段性的過程。血型糖蛋白A的出現(xiàn)表示紅系終末分化的開始,細(xì)胞從原成紅細(xì)胞開始向嗜堿性幼紅細(xì)胞,嗜多色性幼紅細(xì)胞,正染色幼紅細(xì)胞增殖分化,最后細(xì)胞脫核后變成網(wǎng)織紅細(xì)胞。網(wǎng)織紅細(xì)胞經(jīng)過成熟變成成熟紅細(xì)胞后通過骨髓進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)。本文建立了一個穩(wěn)定的模擬紅系體內(nèi)發(fā)育的培養(yǎng)體系,并運(yùn)用蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞學(xué)分析法檢測了數(shù)十種紅系發(fā)育相關(guān)的膜表面蛋白,骨架蛋白以及跨膜蛋白在培養(yǎng)過程中表達(dá)水平的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,Band3在發(fā)育過程中上升的幅度最為明顯而α4integrin,一種粘附分子,先是保持高表達(dá)水平,而后降至最低。我們選取了Band3和a4integrin這兩個變化最大的膜蛋白作為標(biāo)記物,搭配血型糖蛋白A,紅系的特異性標(biāo)記物,對我們的培養(yǎng)體系的分化過程進(jìn)行了監(jiān)測,并選取了第7天和第14天的細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞分選。我們在第7天的細(xì)胞中得到了具有形態(tài)學(xué)特征的原成紅細(xì)胞,早期嗜堿性幼紅細(xì)胞,晚期嗜堿性幼紅細(xì)胞和嗜多色性幼紅細(xì)胞,我們在第十四天的細(xì)胞中得到了具有形態(tài)學(xué)特征的嗜多色性幼紅細(xì)胞和正染色幼紅細(xì)胞,流式細(xì)胞分選... 

【文章來源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫詞簡表
前言
第一章 紅系發(fā)育培養(yǎng)系統(tǒng)的建立
    1.1 材料
        1.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)試劑
        1.1.2 細(xì)胞來源
        1.1.3 CD34~+干細(xì)胞分離設(shè)施和試劑
        1.1.4 細(xì)胞離心涂片及Giemsa染色設(shè)備
        1.1.5 主要儀器
        1.1.6 緩沖液的配制
    1.2 方法
        1.2.1 CD34~+干細(xì)胞分離
        1.2.2 CD34~+細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.3 細(xì)胞離心涂片制備
        1.2.4 Giemsa染色
    1.3 結(jié)果
        1.3.1 細(xì)胞發(fā)育中的形態(tài)的觀察
        1.3.2 細(xì)胞在21天培養(yǎng)系統(tǒng)中的生長情況
    1.4 討論
第二章 紅細(xì)胞膜蛋白在發(fā)育中的變化
    2.1 材料
        2.1.1 抗體純化以及標(biāo)記熒光試劑
        2.1.2 蛋白質(zhì)印跡所用抗體
        2.1.3 流式細(xì)胞學(xué)分析法所用抗體
        2.1.4 蛋白質(zhì)印跡相關(guān)設(shè)備
        2.1.5 流式細(xì)胞學(xué)分析法相關(guān)設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 抗體的純化以及熒光標(biāo)記
        2.2.2 蛋白質(zhì)印跡方法
        2.2.3 流式細(xì)胞學(xué)分析法
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 通過蛋白質(zhì)印跡法對膜蛋白和骨架蛋白的分析
        2.3.2 人紅系發(fā)育終末分化中膜表面蛋白的變化
    2.4 討論
第三章 用Band3和α4 integrin作為標(biāo)記物來對體外培養(yǎng)中紅系終末分化的分析以及根據(jù)這兩個標(biāo)記物將紅系終末發(fā)育的五個期的分選
    3.1 材料
        3.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.1.2 流式細(xì)胞學(xué)分析
        3.1.3 流式細(xì)胞學(xué)分選的儀器和分析軟件
        3.1.4 流式分析以及流式分選所用的抗體
        3.1.5 細(xì)胞離心涂片以及Giemsa染色
    3.2 方法
        3.2.1 用雙標(biāo)記物對培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行分析
        3.2.2 熒光激活的流式細(xì)胞分選
        3.2.3 細(xì)胞離心涂片和Giemsa染色
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 用不同的組合對紅系終末分化發(fā)育的比較以及最終確定Band3和α4integrin為標(biāo)記物
        3.3.2 流式細(xì)胞分選出在培養(yǎng)的CD34~+陽性的細(xì)胞中的不同期的細(xì)胞
    3.4 討論
第四章 體外培養(yǎng)細(xì)胞的有絲分裂能力和不同期細(xì)胞表面蛋白的表達(dá)水平
    4.1 材料
        4.1.1 流式分選過的細(xì)胞的培養(yǎng)材料
        4.1.2 洗脫抗體的材料
        4.1.3 流式細(xì)胞分選所用抗體
        4.1.4 抗體洗脫后再染色時用的抗體
    4.2 方法
        4.2.1 流式細(xì)胞學(xué)分選
        4.2.2 流式細(xì)胞分選后的不同期細(xì)胞的培養(yǎng)以及細(xì)胞計(jì)數(shù)
        4.2.3 抗體洗脫
        4.2.4 抗體洗脫后的細(xì)胞染色
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 紅系終末分化中不同期的有絲分裂能力
        4.3.2 洗脫流式細(xì)胞分選的細(xì)胞上的抗體以及重新染色對其進(jìn)行流式細(xì)胞分析
    4.4 討論
第五章 正常人骨髓中紅系發(fā)育終末分化的研究以及人骨髓中幼稚細(xì)胞的流式細(xì)胞分選
    5.1 材料
        5.1.1 正常人骨髓的來源
        5.1.2 流式細(xì)胞分析所用的抗體
        5.1.3 流式細(xì)胞分選所用的抗體
        5.1.4 骨髓中CD45~+細(xì)胞消除的相關(guān)試劑以及設(shè)備
        5.1.5 細(xì)胞離心涂片以及Giemsa染色制備的設(shè)備
        5.1.6 流式細(xì)胞分析儀器和軟件
        5.1.7 流式細(xì)胞分選儀器和軟件
    5.2 方法
        5.2.1 正常人骨髓中單核細(xì)胞的分離
        5.2.2 骨髓中CD45~+細(xì)胞的消除
        5.2.3 骨髓細(xì)胞流式學(xué)分析
        5.2.4 骨髓流式細(xì)胞學(xué)分選
        5.2.5 細(xì)胞離心涂片和Giemsa染色
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 對于人骨髓的流式細(xì)胞學(xué)分析以及不同期細(xì)胞的劃分策略
        5.3.2 正常人骨髓的流式細(xì)胞分選以及細(xì)胞形態(tài)
        5.3.3 對人正常骨髓中紅系發(fā)育的各個期進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    5.4 討論
第六章 骨髓異常增生綜合癥病人紅系發(fā)育的異常發(fā)生
    6.1 材料
        6.1.1 骨髓異常增生綜合癥的病人骨髓來源
        6.1.2 流式細(xì)胞分析所用的抗體以及儀器設(shè)備
        6.1.3 骨髓中CD45~+細(xì)胞消除的相關(guān)試劑以及設(shè)備
    6.2 方法
        6.2.1 骨髓異常增生綜合癥的骨髓中單核細(xì)胞的分離方法
        6.2.2 骨髓異常增生綜合癥中單核細(xì)胞中CD45+細(xì)胞的消除法
        6.2.3 骨髗異常增生綜合癥中紅系細(xì)胞的流式細(xì)胞學(xué)染色
    6.3 結(jié)果
        6.3.1 骨髓異常增生綜合癥的病人的骨教中紅系發(fā)育異常
    6.4 討論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間主要研究成果
致謝



本文編號：3364341