發(fā)布時間：2021-08-21 11:02

　　1997年H5N1型禽流感病毒首次跨越種屬障礙在香港造成了18例人的感染,其中6例死亡。新基因型的H5N1流感病毒仍然在亞洲尤其是東亞多國傳播,人感染的病例也在不斷出現(xiàn)。人群對H5N1型流感病毒保護性免疫力的普遍缺乏有可能引起新一輪的流感大爆發(fā)。流感病毒的流行為研究病毒-宿主的進化提供了條件。流感病毒蛋白的不斷變異使病毒能逃避宿主的免疫識別�？乖剖橇鞲胁《咀儺惖闹饕侄�,也是病毒進化的主要機制。流感病毒表面糖蛋白血凝素HA分子是病毒基因組中變異率最高的分子,是中和性抗體的主要靶標,其與宿主細胞表面受體唾液酸殘基末端的結(jié)合是決定宿主特異性的主要因素。HA蛋白由HA1和HA2兩個亞單位組成,其中,HA1的變異頻率高于HA2。HA1亞單位處于正達爾文選擇產(chǎn)生新的變異株。對H3亞型HA分子的研究表明,處于HA蛋白表位區(qū)域的氨基酸相對于非表位區(qū)域氨基酸而言,其密碼子使用更具有多樣性。有研究證實了H3亞型HA分子存在免疫優(yōu)勢性位點,一個或兩個免疫優(yōu)勢性位點的替換就能引起抗原性的改變。血凝素HA蛋白抗原性表位作圖是研究其抗原性變異的第一步。我們的研究表明,制備的15株H5 HA蛋白特異的單抗的表... 

【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學重慶市

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

酵母細胞表面呈現(xiàn)融合蛋白

圖 1-2 H5 亞型 HA 分子的 8 個嵌套截短片段以及 5 個截斷片段結(jié)構(gòu)示意圖A: H5 亞型 HA 分子的 8 個嵌套截短片段B: H5 亞型 HA 分子的 5 個截斷片段黑色線條代表的是全長 H5 亞型 HA 分子(amino acids 1-302)，灰色線條代表的是嵌套截短片段以及截斷片段。括號中的數(shù)字代表的是 HA 分子片段的起始和終止位置(不包括 A/Hong Kong/482/97病毒株 HA 序列中的前 16 個氨基酸)。FIG. 1-2 Schematic illustration of the nested-deletion H5 HA fragmentsThe 8 nested-deletion fragments of H5 HA protein that we designed (A) and the additional 5 fragmentsof H5 HA protein within the region of amino acids 1-302 (B) are listed. The black bar represents thefull-length H5 HA, the gray bars represent the nested-deletion H5 HA fragments, and the start and stopamino acid positions on the H5 HA protein (the first 16 amino acids of the H5 HA protein from A/HongKong/482/97were not included) are indicated in parentheses.

是通過將每個蛋白的平均熒光強度除以EBY100/pYD1酵母細胞的熒光強度：比值≥2時就認為是陽性。我們將所有流式檢測結(jié)果轉(zhuǎn)化為RAYS比值，作為縱坐標來評估抗原變性前后與抗體的特異性結(jié)合，試驗結(jié)果總結(jié)于圖1-3。熱變性后單抗H5M2、H5M5、H5M11、H5M12、H5M24和H5M25與全長H5 HA蛋白及其片段HA5-8F的反應性丟失，說明上述單抗識別的是位于H5 HA蛋白1-302氨基酸區(qū)域的連續(xù)性或非連續(xù)性構(gòu)象性表位。片段HA5-8F與單抗H5M28的抗原抗體反應、片段HA5-6F與單抗H5M26的抗原抗體反應也在熱變性后丟失，說明單抗H5M28和 H5M26識別的是位于H5 HA1-302區(qū)域的構(gòu)象性表位。熱變性同樣使單抗H5M9 和H5M29與片段HA5-7F的反應性消失，說明其識別的也是位于H5 HA1-302區(qū)域的構(gòu)象性表位。單抗H5M6、H5M7、H5M8和H5M10與H5 HA片段HA13L的抗原抗體反應在熱變性后丟失，說明它們識別的是位于H5 HA蛋白69-302氨基酸區(qū)域的構(gòu)象性表位。單抗H5M20在熱變性后仍能與酵母表面呈現(xiàn)的H5 HA全長蛋白及其片段HA2-8F反應。尤其是片段HA5F 和 HA8F在熱變性后與單抗H5M20反應的RAYS比值比熱變性前還高，說明單抗H5M20針對的是位于H5 HA蛋白69-133區(qū)域的線性表位。第05期 李�。篐5N1型流感病毒HA蛋白的B細胞表位研究及抗原變異分析 E059-30-21


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