發(fā)布時(shí)間：2021-08-21 11:02

　　1997年H5N1型禽流感病毒首次跨越種屬障礙在香港造成了18例人的感染,其中6例死亡。新基因型的H5N1流感病毒仍然在亞洲尤其是東亞多國(guó)傳播,人感染的病例也在不斷出現(xiàn)。人群對(duì)H5N1型流感病毒保護(hù)性免疫力的普遍缺乏有可能引起新一輪的流感大爆發(fā)。流感病毒的流行為研究病毒-宿主的進(jìn)化提供了條件。流感病毒蛋白的不斷變異使病毒能逃避宿主的免疫識(shí)別�？乖剖橇鞲胁《咀儺惖闹饕侄�,也是病毒進(jìn)化的主要機(jī)制。流感病毒表面糖蛋白血凝素HA分子是病毒基因組中變異率最高的分子,是中和性抗體的主要靶標(biāo),其與宿主細(xì)胞表面受體唾液酸殘基末端的結(jié)合是決定宿主特異性的主要因素。HA蛋白由HA1和HA2兩個(gè)亞單位組成,其中,HA1的變異頻率高于HA2。HA1亞單位處于正達(dá)爾文選擇產(chǎn)生新的變異株。對(duì)H3亞型HA分子的研究表明,處于HA蛋白表位區(qū)域的氨基酸相對(duì)于非表位區(qū)域氨基酸而言,其密碼子使用更具有多樣性。有研究證實(shí)了H3亞型HA分子存在免疫優(yōu)勢(shì)性位點(diǎn),一個(gè)或兩個(gè)免疫優(yōu)勢(shì)性位點(diǎn)的替換就能引起抗原性的改變。血凝素HA蛋白抗原性表位作圖是研究其抗原性變異的第一步。我們的研究表明,制備的15株H5 HA蛋白特異的單抗的表... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

酵母細(xì)胞表面呈現(xiàn)融合蛋白

圖 1-2 H5 亞型 HA 分子的 8 個(gè)嵌套截短片段以及 5 個(gè)截?cái)嗥谓Y(jié)構(gòu)示意圖A: H5 亞型 HA 分子的 8 個(gè)嵌套截短片段B: H5 亞型 HA 分子的 5 個(gè)截?cái)嗥魏谏�條代表的是全長(zhǎng) H5 亞型 HA 分子(amino acids 1-302)，灰色線條代表的是嵌套截短片段以及截?cái)嗥�。括�?hào)中的數(shù)字代表的是 HA 分子片段的起始和終止位置(不包括 A/Hong Kong/482/97病毒株 HA 序列中的前 16 個(gè)氨基酸)。FIG. 1-2 Schematic illustration of the nested-deletion H5 HA fragmentsThe 8 nested-deletion fragments of H5 HA protein that we designed (A) and the additional 5 fragmentsof H5 HA protein within the region of amino acids 1-302 (B) are listed. The black bar represents thefull-length H5 HA, the gray bars represent the nested-deletion H5 HA fragments, and the start and stopamino acid positions on the H5 HA protein (the first 16 amino acids of the H5 HA protein from A/HongKong/482/97were not included) are indicated in parentheses.

是通過將每個(gè)蛋白的平均熒光強(qiáng)度除以EBY100/pYD1酵母細(xì)胞的熒光強(qiáng)度：比值≥2時(shí)就認(rèn)為是陽(yáng)性。我們將所有流式檢測(cè)結(jié)果轉(zhuǎn)化為RAYS比值，作為縱坐標(biāo)來(lái)評(píng)估抗原變性前后與抗體的特異性結(jié)合，試驗(yàn)結(jié)果總結(jié)于圖1-3。熱變性后單抗H5M2、H5M5、H5M11、H5M12、H5M24和H5M25與全長(zhǎng)H5 HA蛋白及其片段HA5-8F的反應(yīng)性丟失，說(shuō)明上述單抗識(shí)別的是位于H5 HA蛋白1-302氨基酸區(qū)域的連續(xù)性或非連續(xù)性構(gòu)象性表位。片段HA5-8F與單抗H5M28的抗原抗體反應(yīng)、片段HA5-6F與單抗H5M26的抗原抗體反應(yīng)也在熱變性后丟失，說(shuō)明單抗H5M28和 H5M26識(shí)別的是位于H5 HA1-302區(qū)域的構(gòu)象性表位。熱變性同樣使單抗H5M9 和H5M29與片段HA5-7F的反應(yīng)性消失，說(shuō)明其識(shí)別的也是位于H5 HA1-302區(qū)域的構(gòu)象性表位。單抗H5M6、H5M7、H5M8和H5M10與H5 HA片段HA13L的抗原抗體反應(yīng)在熱變性后丟失，說(shuō)明它們識(shí)別的是位于H5 HA蛋白69-302氨基酸區(qū)域的構(gòu)象性表位。單抗H5M20在熱變性后仍能與酵母表面呈現(xiàn)的H5 HA全長(zhǎng)蛋白及其片段HA2-8F反應(yīng)。尤其是片段HA5F 和 HA8F在熱變性后與單抗H5M20反應(yīng)的RAYS比值比熱變性前還高，說(shuō)明單抗H5M20針對(duì)的是位于H5 HA蛋白69-133區(qū)域的線性表位。第05期 李�。篐5N1型流感病毒HA蛋白的B細(xì)胞表位研究及抗原變異分析 E059-30-21


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