經(jīng)適當(dāng)修飾改造的N-末端截?cái)嘈椭嗵墙Y(jié)合蛋白（truncated LBP,tLBP）是一種基因片段長(zhǎng)約0.7kb，分子量27kDa，含有親代分子197個(gè)氨基酸的多肽，在分泌至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)時(shí)切割下N-末端25個(gè)氨基酸的信號(hào)肽。該分子保留了與LPS作用的結(jié)合域, 可能更有效地結(jié)合LPS，但不能轉(zhuǎn)移LPS到CD14，從而可阻止LPS-CD14的形成，進(jìn)而抑制單核/巨噬細(xì)胞過(guò)度分泌炎性細(xì)胞因子。發(fā)揮著與親代分子LBP競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合LPS或中和LPS的作用，但有關(guān)tLBP的確切生物學(xué)活性以及與LPS的中和作用仍不十分清楚。本課題在已獲得人LBP全長(zhǎng)cDNA的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)了擴(kuò)增tLBP基因的引物，成功克隆到目的基因片段，并順利插入桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pFASTBAC以及完成了目的基因的特異轉(zhuǎn)座和病毒重組，成功構(gòu)建了桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)。應(yīng)用Sf21昆蟲(chóng)細(xì)胞和BAC-TO-BAC桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)、TALON金屬鏊合層析等方法表達(dá)純化了重組的人N末端脂多糖結(jié)合蛋白cDNA的表達(dá)產(chǎn)物，通過(guò)Lowry, SDS-PAGE, Western blot及毛細(xì)管電泳等方法對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行生化特性鑒定，經(jīng)體外與LPS結(jié)合及細(xì)胞評(píng)價(jià)活性... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

一應(yīng)用BAC-TO-BAC表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建重組病毒流程

圖I一擴(kuò)增片段的純化

圖 1-10 重組 BacmidtLBP 的 á-互補(bǔ)篩圖中箭頭所示白色菌落為重組菌落Fig.1-10 á-supplementary screening of recombinan(white colony with arrow indicating recombinanBacmidtLBP DNA的凝膠電泳 DNA 分子量大于 135kb 要使用低電壓和低濃度1 2

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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