第一部分 peb1A基因表達載體的構(gòu)建及相應(yīng)蛋白的表達目的 ：以基因工程技術(shù)構(gòu)建編碼空腸彎曲菌（CJ）粘附蛋白（periplasmic solute-binding protein，PEB1）編碼基因peb1A的原核重組表達質(zhì)粒，并獲取目的蛋白，為進一步研究其生物學特性和制備CJ亞單位疫苗奠定基礎(chǔ)。方法：（1）表達質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定：以含有BamHⅠ和Hind Ⅲ酶切位點的同一對引物行PCR反應(yīng)以獲取七個血清株空腸彎曲菌的peb1A基因片段，測序比較其同源性。小量提取質(zhì)粒pET32a（+）和pQE30，選擇與GBS最為相關(guān)的Pen19 CJ 標準株P(guān)CR產(chǎn)物為目的片段，同時對目的片段和pET32a（+）、pQE30行雙酶切反應(yīng)；酶切產(chǎn)物純化后連接，轉(zhuǎn)染入大腸桿菌JM109，蘭白斑和氨芐青霉素抗性平板篩選陽性菌落，重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶切和PCR反應(yīng)鑒定后測序，分別命名為pET32a（+）-peb1A和pQE30-peb1A;（2）原核表達重組質(zhì)粒在大腸桿菌中的表達及純化:將重組質(zhì)粒pET32a（+）-peb1A轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21（DE3），pQE30-peb1A轉(zhuǎn)化入SG13009（p... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：133 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

pET32a(+)-peb1A重組質(zhì)粒的構(gòu)建Fig1-1ThereconstructionofpET32a(+)-peb1Aplasmid

【參考文獻】：
期刊論文
[1]空腸彎曲菌脂多糖在空腸彎曲菌誘發(fā)周圍神經(jīng)病中的致病作用[J]. 高玉興,蔡方成.  實用兒科臨床雜志. 2002(05)
[2]不同血清型空腸彎曲菌免疫大鼠的血清及單個核細胞轉(zhuǎn)移誘發(fā)周圍神經(jīng)病變的比較研究[J]. 張杰敏,蔡方成.  中華兒科雜志. 2002(01)
[3]空腸彎曲菌誘發(fā)周圍神經(jīng)病的免疫學證據(jù)[J]. 張杰敏,蔡方成.  中華兒科雜志. 2001(02)
[4]不同菌型空腸彎曲菌免疫誘發(fā)大鼠變態(tài)反應(yīng)性周圍神經(jīng)病的對比研究[J]. 張杰敏,蔡方成.  中華兒科雜志. 2001(01)
[5]空腸彎曲菌感染致人畜共患的周圍神經(jīng)病[J]. 劉超,蔡方成,席孝莊,丁波,翟奇,張曉萍,銀平.  中華兒科雜志. 2000(01)
[6]空腸彎曲菌誘發(fā)實驗性周圍神經(jīng)病的免疫學機理的研究[J]. 朱春霓,蔡方成,張曉萍.  中華兒科雜志. 1999(09)
[7]不同類型格林巴利綜合征患者單個核細胞免疫學致病特征的實驗研究[J]. 吳梅,蔡方成.  中華兒科雜志. 1998(08)
[8]空腸彎曲菌共同抗原的實驗研究及初步應(yīng)用[J]. 張京海,杜桂香,張樂海,張桂珍,王宜軍,孫守寶,謝學軍.  臨床檢驗雜志. 1997(02)



本文編號：3334475