背景:目前骨髓單核細胞的分離提取國內外文獻報道,大多是利用RAW264.7細胞誘導分化為破骨細胞。目的:探討分離、培養(yǎng)、純化和鑒定C57BL/6小鼠骨髓單核細胞的方法,觀察小鼠骨髓單核細胞體外生長特征,誘導其向破骨細胞分化。方法:無菌分離C57BL/6小鼠股骨和脛骨,取出骨髓細胞,提取過程中先用紅細胞裂解液去除紅細胞;骨髓細胞過夜培養(yǎng)后（大于16 h）,第2天分離出懸浮細胞,在含有巨噬細胞集落刺激因子的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)獲得貼壁的小鼠骨髓單核細胞。通過換液對小鼠骨髓單核細胞進行純化和擴增培養(yǎng)。進行形態(tài)學觀察,測定生長曲線,用流式細胞儀檢測原代小鼠骨髓單核細胞細胞表面抗原,加入巨噬細胞集落刺激因子和核因子κB受體活化因子配基誘導分化為破骨細胞。結果與結論:新分離的小鼠骨髓單核細胞呈小圓形,兩端伸出觸角,培養(yǎng)5 d后,細胞成橢圓形,兩端的觸角更明顯,增殖依賴巨噬細胞集落刺激因子。流式結果顯示分離的小鼠骨髓單核細胞純度較高,能夠誘導分化為破骨細胞。利用間充質干細胞與單核細胞的貼壁能力不同及巨噬細胞集落刺激因子顯著促進單核細胞貼壁增殖的特性能有效分離獲得穩(wěn)定生長的小鼠骨髓單核細胞。培養(yǎng)的小鼠骨髓... 

【文章來源】：中國組織工程研究. 2015,19(06)北大核心

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本文編號：3333104