背景:目前骨髓單核細(xì)胞的分離提取國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道,大多是利用RAW264.7細(xì)胞誘導(dǎo)分化為破骨細(xì)胞。目的:探討分離、培養(yǎng)、純化和鑒定C57BL/6小鼠骨髓單核細(xì)胞的方法,觀察小鼠骨髓單核細(xì)胞體外生長特征,誘導(dǎo)其向破骨細(xì)胞分化。方法:無菌分離C57BL/6小鼠股骨和脛骨,取出骨髓細(xì)胞,提取過程中先用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞;骨髓細(xì)胞過夜培養(yǎng)后（大于16 h）,第2天分離出懸浮細(xì)胞,在含有巨噬細(xì)胞集落刺激因子的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)獲得貼壁的小鼠骨髓單核細(xì)胞。通過換液對小鼠骨髓單核細(xì)胞進(jìn)行純化和擴(kuò)增培養(yǎng)。進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,測定生長曲線,用流式細(xì)胞儀檢測原代小鼠骨髓單核細(xì)胞細(xì)胞表面抗原,加入巨噬細(xì)胞集落刺激因子和核因子κB受體活化因子配基誘導(dǎo)分化為破骨細(xì)胞。結(jié)果與結(jié)論:新分離的小鼠骨髓單核細(xì)胞呈小圓形,兩端伸出觸角,培養(yǎng)5 d后,細(xì)胞成橢圓形,兩端的觸角更明顯,增殖依賴巨噬細(xì)胞集落刺激因子。流式結(jié)果顯示分離的小鼠骨髓單核細(xì)胞純度較高,能夠誘導(dǎo)分化為破骨細(xì)胞。利用間充質(zhì)干細(xì)胞與單核細(xì)胞的貼壁能力不同及巨噬細(xì)胞集落刺激因子顯著促進(jìn)單核細(xì)胞貼壁增殖的特性能有效分離獲得穩(wěn)定生長的小鼠骨髓單核細(xì)胞。培養(yǎng)的小鼠骨髓... 

【文章來源】：中國組織工程研究. 2015,19(06)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁


本文編號：3333104