發(fā)布時間：2021-08-03 19:43

　　研究背景和目的：銅綠假單胞菌(（Pseudomonas aeruginosa, PA）是常見的革蘭氏陰性條件致病菌,在臨床分離的非發(fā)酵病原菌中,PA檢出率高,危害著人類的健康與生命。在抗生素選擇壓力的脅迫下,耐藥基因水平轉(zhuǎn)移速度加快是導(dǎo)致今天細菌耐藥嚴(yán)峻局面的主要原因之一。已有研究證明Ti質(zhì)粒在根癌土壤桿菌接合轉(zhuǎn)移過程中受到群體感應(yīng)信號分子即�；呓z氨酸內(nèi)酯（acylated homoserine lactones, HSL）的調(diào)控,然而,HSL對PA接合反應(yīng)的影響尚未見報道。因此,本實驗分三部分研究：1.通過繪制PAO1和PA-△lasⅠ/rhlⅠ的生長曲線掌握細菌的生長情況。2.構(gòu)建能在銅綠假單胞菌（PA）與大腸埃希氏菌（E.coli）間進行接合轉(zhuǎn)移的質(zhì)粒。3.通過外源性加入HSL（3-oxo-C12-HSL、C4-HSL）,觀察HSL對E.coli與PA-△lasⅠ/rhlⅠ接合反應(yīng)的影響。方法：1.用分光光度計測定細菌懸液的光密度來推知菌液濃度,繪出生長曲線。2.通過NCBI blastn程序分析質(zhì)粒pCVD442接合反應(yīng)起始序列oriT,PCR擴增oriT后插入pMD18-T... 

【文章來源】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
引言
第一部分 PA01和PA-△lasⅠ/rh1Ⅰ生長曲線的比較
    1.1 材料
        1.1.1 實驗菌株
        1.1.2 主要培養(yǎng)基及其配制
        1.1.3 主要儀器
        1.1.4 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 培養(yǎng)
        1.2.2 編號
        1.2.3 接種
        1.2.4 生長曲線測定
        1.2.5 統(tǒng)計學(xué)分析
    1.3 結(jié)果與分析
        1.3.1 結(jié)果
        1.3.2 繪制生長曲線
    1.4 討論
第二部分 pUCP24T載體的構(gòu)建與性能分析
    2.1 材料
        2.1.1 實驗菌株與質(zhì)粒
        2.1.2 溶液的制備
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 oriT序列引物設(shè)計和PCR
        2.2.2 重組質(zhì)粒pMD18-oriT的構(gòu)建及鑒定
        2.2.3 重組質(zhì)粒pUCP24T的構(gòu)建及鑒定
        2.2.4 接合轉(zhuǎn)移
        2.2.5 重組質(zhì)粒的穩(wěn)定性分析
        2.2.6 pUCP24T質(zhì)粒提取
        2.2.7 實驗具體操作步驟
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 oriT序列比對分析及PCR擴增pCVD442 oriT片段
        2.3.2 重組質(zhì)粒pMD18-oriT的構(gòu)建及鑒定
        2.3.3 重組質(zhì)粒pUCP24T的鑒定
        2.3.4 接合反應(yīng)
        2.3.5 重組質(zhì)粒pUCP24T遺傳穩(wěn)定性的測定
    2.4 討論
第三部分 HSL對PA-△lasⅠ/rh1Ⅰ接合反應(yīng)的影響
    3.1 材料
        3.1.1 實驗菌株與質(zhì)粒
        3.1.2 抗生素與培養(yǎng)基
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要儀器
    3.2 方法
        3.2.1 配制HSL
        3.2.2 培養(yǎng)
        3.2.3 接合試驗
        3.2.4 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 lasⅠ/rh1Ⅰ基因突變對接合頻率的影響
        3.3.2 C4-HSL對接合頻率的影響
        3.3.3 3-oxo-C12-HSL對接合頻率的影響
        3.3.4 混合3-oxo-C12-HSL、C4-HSL對接合頻率的影響
    3.4 討論
結(jié)語
參考文獻
附錄
綜述
    參考文獻
在校期間發(fā)表論文情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3320218