發(fā)布時(shí)間：2021-07-29 18:23

　　目的探討Shh信號通路對大腦皮質(zhì)反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞（RAS）獲得神經(jīng)干細(xì)胞潛能的影響。方法體外原代培養(yǎng)SD大鼠大腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞,以腫瘤壞死因子（TNF）-α、白細(xì)胞介素（IL）-1α和C1q三種因子誘導(dǎo)炎癥型RAS,劃痕實(shí)驗(yàn)制備創(chuàng)傷型RAS,使用免疫熒光染色法觀察細(xì)胞形態(tài)及純度。實(shí)驗(yàn)分為普通星形膠質(zhì)細(xì)胞組（對照組）、炎癥組、劃痕組（創(chuàng)傷組）。炎癥組培養(yǎng)至干預(yù)后24 h,對照組和劃痕組培養(yǎng)至第5天進(jìn)行免疫熒光染色觀察巢蛋白（Nestin）陽性細(xì)胞,運(yùn)用Western blot技術(shù)檢測不同損傷模型的細(xì)胞中Shh蛋白的表達(dá)量。之后各組細(xì)胞培養(yǎng)至第7天更換神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基,將前述3組各自再分為激活組（各組細(xì)胞更換神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基后添加Shh激活劑SAG）和抑制組（各組細(xì)胞更換神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基后添加Shh抑制劑環(huán)巴胺）兩個(gè)亞組,培養(yǎng)14 d后采用qRT-PCR檢測各亞組RAS源性神經(jīng)干細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)量。結(jié)果細(xì)胞損傷模型中,免疫熒光染色證明各組細(xì)胞中劃痕組Nestin陽性細(xì)胞明顯多于炎癥組和對照組。Western blot結(jié)果顯示2組損傷細(xì)胞中劃痕組Shh蛋白表達(dá)量高于炎癥組（P<0... 

【文章來源】：天津醫(yī)藥. 2019,47(07)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2主要試劑與儀器
    1.3方法
        1.3.1原代AST的提取和鑒定
        1.3.2免疫熒光技術(shù)檢測AST純度
        1.3.3實(shí)驗(yàn)分組
        1.3.4免疫熒光染色法檢測Nestin表達(dá)量
        1.3.5Western blot檢測Shh蛋白表達(dá)量
        1.3.6Shh信號通路的干預(yù)
        1.3.7熒光實(shí)時(shí)定量PCR (q RT-PCR）檢測各組中神經(jīng)干細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)水平
    1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 AST的培養(yǎng)及純度鑒定
    2.2 各組細(xì)胞中Nestin蛋白的表達(dá)量
    2.3 不同損傷類型細(xì)胞中Shh蛋白表達(dá)量
    2.4 Shh激活劑對不同損傷類型誘導(dǎo)RAS源性神經(jīng)干細(xì)胞基因表達(dá)的影響
    2.5 Shh抑制劑對不同損傷類型誘導(dǎo)RAS源性神經(jīng)干細(xì)胞基因表達(dá)的影響
3 討論
    3.1 RAS的特點(diǎn)
    3.2 Shh蛋白在不同損傷模型中的表達(dá)差異
    3.3 Shh信號通路的激活和抑制
    3.4 Shh信號通路誘導(dǎo)RAS獲得干細(xì)胞潛能的優(yōu)缺點(diǎn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]星形膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)元的研究進(jìn)展[J]. 康文博,張賽,梁海乾.  天津醫(yī)藥. 2015(06)



本文編號：3309822