發(fā)布時間：2017-04-27 11:02

  本文關(guān)鍵詞：肩袖岡上肌骨—肌腱結(jié)合部損傷愈合模型的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景 骨-肌腱結(jié)合部(Bone-Tendon Junction, BTJ)損傷是一種常見的疾病。目前對于肩袖損傷后的BTJ損傷修復(fù)機制尚未闡明，尤其在肌腱與骨愈合期間，任何過于激進的康復(fù)都有可能導(dǎo)致結(jié)合部斷裂而失敗。因此，我們需要構(gòu)建一種合適的動物模型，進一步探索能有效改進肩袖BTJ愈合的速度和強度的新方法。本研究根據(jù)肩袖損傷的臨床特點，設(shè)計了SD大鼠的岡上肌腱損傷愈合的模型，并驗證該模型的實用性。 目的 本研究設(shè)計了新的肩袖岡上肌BTJ損傷愈合動物模型，以模擬BTJ損傷后愈合的組織學(xué)過程，為肩袖岡上肌損傷愈合機制提供了理論和實驗基礎(chǔ)。 方法 1、實驗設(shè)計： 雌性SD大鼠40只(第二軍醫(yī)大學(xué)動物實驗中心提供)，體重(180-200)g。5只大鼠為正常對照組，其余35只為實驗組，分別在建模后7d、14d、21d各處死10只進行組織學(xué)和免疫組化觀察，，實驗組行左肩關(guān)節(jié)岡上肌損傷與重建手術(shù)，對照組不處理。 2、模型制備的手術(shù)方法： 10%水合氯醛注射液400mg／kg腹腔注射麻醉，麻醉后取俯臥位并置于無菌臺。在左肩部肩胛岡區(qū)域，肩胛骨下緣切開2-3cm橫行皮膚切口，沿大圓肌與背闊肌肌間隙斜向上銳性剝離至肩胛骨，顯露肩胛骨中下段，輕微可見肩胛骨下緣外側(cè)岡上肌以及腱性部分，沿腱性部分找到與左側(cè)肱骨連接部，并顯露肱骨頭，將SD大鼠一側(cè)肩的岡上肌腱自骨-肌腱結(jié)合部切斷，用布巾鉗在大結(jié)節(jié)原岡上肌附著的足跡處建立兩個平行的骨性隧道，再用不可吸收肌腱縫合線穿過骨道，將岡上肌腱縫合在原位，建立SD大鼠骨表面BTJ損傷愈合模型。 3、取材及制作標(biāo)本： 分別在建模后7d、14d、21d各處死10只進行組織學(xué)和免疫組化觀察，切取岡上肌腱遠端以及與其相連的肱骨骨塊為一個完整的BTJ樣本，同時取1只正常組大鼠的左側(cè)BTJ樣本為對照。進行HE染色，比較愈合過程不同時間BTJ中瘢痕組織的形成和轉(zhuǎn)歸的特點，以及纖維軟骨的分布及其與正常BTJ的差別。免疫組化染色，400倍光鏡下觀察切片中TGF-β1、AR-Smads的表達和分布情況. 4、觀察方法和結(jié)果測定： 400倍光鏡下觀察切片中TGF-β1、AR-Smads的表達和分布情況，每張切片選隨機取5個高倍視野。采用二級計分法判定結(jié)果：按染色強度分級，淡黃為1分，黃或深黃2分，褐或棕黃色3分；陽性細胞計10％為0分，陽性細胞計數(shù)10％～25％為1分。陽性細胞計數(shù)25～50％為2分，陽性細胞計數(shù)50～75％為3分，陽性細胞計數(shù)75％為4分；兩者相加2分為陰性(－)；2～3分陽性(＋)；4～5分中等陽性(＋＋)；6～7分強陽性(＋＋＋)。 5、統(tǒng)計學(xué)分析： 不同時間點的TGF-β1、AR-Smads的陽性率比較采用卡方檢驗，以明確TGF-β1、AR-Smads的表達在不同時間點是否存在差異。 結(jié)果 1、觀察岡上肌腱遠端以及與其相連的肱骨骨塊完整的BTJ樣本比較。對照組：可見正常岡上肌肌腱與肱骨的正常骨腱連接；術(shù)后7d、14d、21d組：可見岡上肌肌腱與肱骨連接處周圍瘢痕組織明顯增生，且隨時間增加瘢痕組織增生范圍逐漸增大。 2、HE染色光學(xué)顯微鏡觀察: HE染色示BTJ處肌腱纖維、軟骨以及骨組織層次清楚，細胞排列整齊。術(shù)后7d、14d：HE染色示BTJ處梭形成纖維細胞滿視野，未見軟骨細胞。術(shù)后21d：HE染色示BTJ處成纖維細胞內(nèi)可見散在少量軟骨細胞增生。 3、免疫組化普通光學(xué)顯微鏡觀察。術(shù)后各時間點與對照組相比均有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。 TGF-β1在術(shù)后7d時陽性率20%，14d時陽性率60%,21d時陽性率50%，其中14d與7d相比有明顯統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）,其余比較無明顯統(tǒng)計學(xué)意義。 AR-Smads在術(shù)后7d時陽性率分別為30%，14d時率70%，21d時陽性率60%，其中在14d與7d相比有明顯統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）,21d與14d相比無明顯統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。 結(jié)論 研究表明，在肌腱修復(fù)后腱骨界面愈合早期有多種生長因子高表達，但其中被認為與瘢痕的形成關(guān)系最為密切的是TGF-β1。在大鼠前交叉韌帶重建的模型中，術(shù)后4天BTJ內(nèi)便可見分泌TGF-β1的主要細胞-巨噬細胞的積聚，一直持續(xù)到術(shù)后3-4周。在大鼠岡上肌止點損傷修復(fù)的愈合早期，TGF-β1在止點處積聚，在術(shù)后10天達到高峰，正好與隨后的BTJ瘢痕增生的高峰吻合。本研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1在術(shù)后14天時出現(xiàn)高表達，并且持續(xù)表達至術(shù)后21天，與隨后的BTJ瘢痕增生的高峰一致。AR-Smads(包括Smad2和3)在術(shù)后14天時也出現(xiàn)高表達，與隨后的BTJ瘢痕增生的高峰一致。通過該研究證實TGF-β1、AR-Smads是促使BTJ愈合過程中瘢痕發(fā)生的關(guān)鍵因子之一。以上結(jié)論表明該模型符合BTJ損傷愈合模型標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)用價值較高。
【關(guān)鍵詞】：骨腱結(jié)合部 動物模型 岡上肌
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R687.2
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 英文縮略詞表11-12
• 前言12-20
• 參考文獻16-20
• 第一部分 SD 大鼠肩袖岡上肌骨肌腱結(jié)合損傷后愈合模型的建立及組織學(xué)變化20-29
• 一、引言20-21
• 二、材料與方法21-23
• 三、結(jié)果23-24
• 四、討論24-25
• 五、附圖25-28
• 參考文獻28-29
• 第二部分 SD 大鼠肩袖岡上肌骨肌腱結(jié)合損傷愈合模型的免疫組化結(jié)果分析29-40
• 一、引言29
• 二、材料與方法29-33
• 三、結(jié)果33
• 四、討論33-35
• 五、附圖35-38
• 參考文獻38-40
• 全文總結(jié)40-41
• 文獻綜述 骨肌腱接合部損傷愈合動物模型的研究進展41-51
• 參考文獻47-51
• 在校期間發(fā)表論文和參加科研工作情況51-52
• 致謝52

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 江斌;陳鴻輝;;骨-肌腱結(jié)合部損傷愈合研究進展[J];國際骨科學(xué)雜志;2009年05期

  本文關(guān)鍵詞：肩袖岡上肌骨—肌腱結(jié)合部損傷愈合模型的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：330468