目的將體內(nèi)外感染BALB/c小鼠人巨細胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）分離株UL83、UL54基因進行遺傳變異分析,篩選影響病毒跨種屬感染的相關(guān)基因,為進一步探索其機制提供線索。方法（1）1.45×10⁶ PFU/ml的HCMV AD169株（本室保存）、3×10⁵PFU/ml的山東株（山東醫(yī)學科學院惠贈）腹腔注射6～8周SPF級BALB/c小鼠1.0ml/只,雌雄各6只作為實驗組,同時設(shè)立滅活病毒對照組和細胞對照組。一個月后取各組小鼠大腦皮質(zhì)組織接種人胚胎成纖維細胞（HF）進行病毒分離與鑒定（PCR檢測HCMV UL83）、RT-PCR檢測大腦組織勻漿中HCMV UL54基因的轉(zhuǎn)錄。將從小鼠體內(nèi)分離到的HCMV病毒命名為體內(nèi)株（下同）。（2）以MOI=100的HCMVAD169株接種至BALB/c小鼠原代胚胎成纖維細胞（MF）和HF細胞,鏡下逐日觀察HCMV特征性細胞病變效應(yīng)（CPE）并傳代三次。待出現(xiàn)細胞病變后采用PCR和RT-PCR檢測HCMV特異性基因UL83、IE基因的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。將從MF中分離到的HC... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學安徽省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

小鼠大腦皮質(zhì)組織病毒分離結(jié)果(未染色x100)

安徽醫(yī)科大學碩士學位論文766bp處有特異性的擴增條帶。其他各組在盲傳3代后均未發(fā)現(xiàn)細胞病變效應(yīng)，PCR也未檢測到特異性條帶(圖2)。圖1小鼠大腦皮質(zhì)組織病毒分離結(jié)果(未染色x100) Fig.1Resultofvirusisolationineerebraleo血 xofmiee(a)正常HF細胞 (a)ThenormalHFcells(b)病變HF細胞 (b)pathologiealHFeells1000b750bP圖2小鼠大腦皮質(zhì)組織病毒分離PCR檢測 HCMVUL83基因結(jié)果 Fig.2ResultofPCRUL83DNAincerebralcortexofmice泳道1:分子量標準泳道2:陽性對照泳道3:陰性對照泳道 4:HCMVAD169組泳道5:山東株組泳道6:HF細胞對照組泳道7:滅活病毒組 lanel:DL2000MarkerlaneZ:Positiveeontrollane3:negativeeontrollane4:HCMVAD169 lanes:Shandongstralnlane6:HFeelllane7:inactivationgrouP 3.2.2RT-PCR檢測大腦皮質(zhì)組織中 HCMVUL54基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物小鼠大腦皮質(zhì)組織勻漿 HCMVUL54基因Rl二PCR結(jié)果如圖3所示。實驗組

圖3RT-PCR檢測小鼠大腦皮質(zhì)組織中HCMVUL54基因轉(zhuǎn)錄Fig.3取sultofRT一pCR譏54羅neineerebraleortexofmi道1:分子量標準道5:山東株組泳道2:陽性對照泳道3:陰性對照泳道6:HF細胞對照組泳道7:泳道4滅活病


本文編號：3295969