本文關(guān)鍵詞：水痘—帶狀皰疹病毒基因型分析和gE糖蛋白的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究我國(guó)不同地區(qū)水痘-帶狀皰疹病毒(Varicella-zoster virus, VZV)的基因型分布,明確不同地區(qū)流行的VZV病毒株的主要基因型及其與國(guó)外不同地區(qū)基因型的差異,分析代表性病毒株gE糖蛋白的基因序列,了解病毒的進(jìn)化狀態(tài)以及抗原表位發(fā)生變異的情況。初步開展VZV gE糖蛋白胞外域結(jié)構(gòu)(氨基酸1-539)的克隆及原核表達(dá),構(gòu)建gE糖蛋白特異性免疫原性的融合表達(dá)載體,進(jìn)行原核表達(dá)。 方法2007.7-2008.7期間在合肥分離到的44株VZV病毒株,以及2010.12～2011.6期間分別從長(zhǎng)春、北京、西安、烏魯木齊、拉薩、廣州和上海7個(gè)城市的三甲醫(yī)院皮膚科收集水痘和帶狀皰疹患者的皰疹液拭子和皮膚痂片318份,樣本數(shù)總計(jì)為362份。首先,采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法篩選陽(yáng)性樣本。其次,對(duì)ORFs1、6、12、16、17、21、22、35、37、50、54、55、56、60和66的PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,用單個(gè)核苷酸多態(tài)性(SNP)譜的方法分析確定病毒株的基因型。然后,PCR擴(kuò)增gE基因的全長(zhǎng)片段,并進(jìn)行測(cè)序分析。最后,構(gòu)建v-Oka病毒株gE糖蛋白的表達(dá)載體以及在大腸桿菌中進(jìn)行原核表達(dá)。 結(jié)果經(jīng)PCR檢測(cè),362份樣本中VZV DNA的陽(yáng)性標(biāo)本為348份,陽(yáng)性率為96.1%。SNP分析顯示348株病毒株的基因型分為4種,其中有313株屬于clade2遺傳支(89.9%),22株為clade5遺傳支(6.32%),5株屬于clade3遺傳支(1.44%),1株屬于cladel遺傳支(0.29%)。另有7株病毒(2.01%)兼有不同遺傳支的特征,按照目前國(guó)際通用的分型方法不能歸屬于任何明確的遺傳支。選擇代表各不同遺傳支的病毒株,進(jìn)行g(shù)E基因序列分析,除了發(fā)現(xiàn)3個(gè)國(guó)外已有報(bào)道的1個(gè)同義突變(T660C)和2個(gè)反義突變(C119T,C1606A),還發(fā)現(xiàn)了3個(gè)新的反義突變(C56T、C1109T、C917A)和4個(gè)同義突變(C54T、T1075C、T816C、G279A)。成功構(gòu)建pET28-gE(1～539aa)重組表達(dá)質(zhì)粒,并能夠在大腸桿菌中表達(dá)59kDa大小的重組蛋白。 結(jié)論我國(guó)VZV病毒株的遺傳呈現(xiàn)高度多樣性,雖然89.9%的病毒株為clade2遺傳支,但首次在我國(guó)新疆地區(qū)發(fā)現(xiàn)了clade5遺傳支的VZV,在長(zhǎng)春市和西安市還發(fā)現(xiàn)了目前尚未能分型的7株病毒。對(duì)18株病毒株gE基因序列分析,在gE的e1和c1抗原表位的編碼區(qū)內(nèi)中檢出1個(gè)新型反義突變(C917A),需要進(jìn)一步研究該突變對(duì)該毒株免疫原性和致病性的影響。成功構(gòu)建pET28-gE(1～539aa)重組表達(dá)質(zhì)粒并原核表達(dá),有助于構(gòu)建并表達(dá)gE融合重組蛋白,為研發(fā)VZV亞單位疫苗打下基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：水痘-帶狀皰疹病毒 基因型 gE糖蛋白 突變 原核表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R373
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 引言10-15
• 材料及方法15-23
• 結(jié)果23-35
• 討論35-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-48
• 附錄一：患者信息調(diào)查表48-49
• 附錄二：PET28-GE(1～539AA)重組質(zhì)粒序列49-50
• 附錄三：個(gè)人簡(jiǎn)歷50-52
• 附錄四：致謝52-53
• 綜述53-66
• 參考文獻(xiàn)63-66

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 殷大鵬;;2006年中國(guó)水痘流行病學(xué)分析[J];預(yù)防醫(yī)學(xué)論壇;2007年06期

2 王艷;馬艷;韓悅;郭軍巧;;遼寧省水痘-帶狀皰疹病毒基因型分析[J];中國(guó)公共衛(wèi)生;2012年01期

3 楊吉星;居麗雯;施強(qiáng);李峰;呂錫宏;蔣露芳;;上海地區(qū)水痘帶狀皰疹病毒基因型研究[J];中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2008年02期

  本文關(guān)鍵詞：水痘—帶狀皰疹病毒基因型分析和gE糖蛋白的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：329493