本文關鍵詞：水痘—帶狀皰疹病毒基因型分析和gE糖蛋白的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究我國不同地區(qū)水痘-帶狀皰疹病毒(Varicella-zoster virus, VZV)的基因型分布,明確不同地區(qū)流行的VZV病毒株的主要基因型及其與國外不同地區(qū)基因型的差異,分析代表性病毒株gE糖蛋白的基因序列,了解病毒的進化狀態(tài)以及抗原表位發(fā)生變異的情況。初步開展VZV gE糖蛋白胞外域結構(氨基酸1-539)的克隆及原核表達,構建gE糖蛋白特異性免疫原性的融合表達載體,進行原核表達。 方法2007.7-2008.7期間在合肥分離到的44株VZV病毒株,以及2010.12～2011.6期間分別從長春、北京、西安、烏魯木齊、拉薩、廣州和上海7個城市的三甲醫(yī)院皮膚科收集水痘和帶狀皰疹患者的皰疹液拭子和皮膚痂片318份,樣本數(shù)總計為362份。首先,采用聚合酶鏈反應(PCR)方法篩選陽性樣本。其次,對ORFs1、6、12、16、17、21、22、35、37、50、54、55、56、60和66的PCR產(chǎn)物進行測序,用單個核苷酸多態(tài)性(SNP)譜的方法分析確定病毒株的基因型。然后,PCR擴增gE基因的全長片段,并進行測序分析。最后,構建v-Oka病毒株gE糖蛋白的表達載體以及在大腸桿菌中進行原核表達。 結果經(jīng)PCR檢測,362份樣本中VZV DNA的陽性標本為348份,陽性率為96.1%。SNP分析顯示348株病毒株的基因型分為4種,其中有313株屬于clade2遺傳支(89.9%),22株為clade5遺傳支(6.32%),5株屬于clade3遺傳支(1.44%),1株屬于cladel遺傳支(0.29%)。另有7株病毒(2.01%)兼有不同遺傳支的特征,按照目前國際通用的分型方法不能歸屬于任何明確的遺傳支。選擇代表各不同遺傳支的病毒株,進行gE基因序列分析,除了發(fā)現(xiàn)3個國外已有報道的1個同義突變(T660C)和2個反義突變(C119T,C1606A),還發(fā)現(xiàn)了3個新的反義突變(C56T、C1109T、C917A)和4個同義突變(C54T、T1075C、T816C、G279A)。成功構建pET28-gE(1～539aa)重組表達質粒,并能夠在大腸桿菌中表達59kDa大小的重組蛋白。 結論我國VZV病毒株的遺傳呈現(xiàn)高度多樣性,雖然89.9%的病毒株為clade2遺傳支,但首次在我國新疆地區(qū)發(fā)現(xiàn)了clade5遺傳支的VZV,在長春市和西安市還發(fā)現(xiàn)了目前尚未能分型的7株病毒。對18株病毒株gE基因序列分析,在gE的e1和c1抗原表位的編碼區(qū)內中檢出1個新型反義突變(C917A),需要進一步研究該突變對該毒株免疫原性和致病性的影響。成功構建pET28-gE(1～539aa)重組表達質粒并原核表達,有助于構建并表達gE融合重組蛋白,為研發(fā)VZV亞單位疫苗打下基礎。
【關鍵詞】：水痘-帶狀皰疹病毒 基因型 gE糖蛋白 突變 原核表達
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R373
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 引言10-15
• 材料及方法15-23
• 結果23-35
• 討論35-41
• 結論41-42
• 參考文獻42-48
• 附錄一：患者信息調查表48-49
• 附錄二：PET28-GE(1～539AA)重組質粒序列49-50
• 附錄三：個人簡歷50-52
• 附錄四：致謝52-53
• 綜述53-66
• 參考文獻63-66

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 殷大鵬;;2006年中國水痘流行病學分析[J];預防醫(yī)學論壇;2007年06期

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3 楊吉星;居麗雯;施強;李峰;呂錫宏;蔣露芳;;上海地區(qū)水痘帶狀皰疹病毒基因型研究[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2008年02期

  本文關鍵詞：水痘—帶狀皰疹病毒基因型分析和gE糖蛋白的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：329493