人纖維蛋白原（fibrinogen,Fg）即凝血因子Ⅰ,是血漿中含量最高的凝血因子,在凝血級聯(lián)反應(yīng)的最后一步,激活后的凝血酶使Fg轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白,發(fā)揮止血功能。Fg是用于外科止血非常有效的生物膠的主要成分。本研究以正常人血漿低溫乙醇法分離的Cohn FⅠ和Cohn FⅠ+Ⅲ（組分Ⅰ及組分Ⅰ+Ⅲ沉淀）為原材料,通過甘氨酸沉淀后,分別用離子交換與疏水層析兩種方法提取Fg。首先對原材料（FⅠP及FⅠ+ⅢP）的溶解條件、Fg的保存緩沖液進行了摸索和優(yōu)化,溶解時原材料（FⅠP及FⅠ+ⅢP）與緩沖液A的比例為3～4g:30ml,溶解時間為90min;Fg的保存緩沖液為pH范圍6.8～7.2、NaCl濃度范圍0.6～0.8mol/L的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液,實驗結(jié)果表明保存緩沖液在24h內(nèi)維持Fg活性效果明顯。同時對層析前樣品的活性穩(wěn)定時間進行了檢測,結(jié)果表明為維持Fg的活性,層析前樣品處理完成后應(yīng)立即上層析柱。其次對FⅠP及FⅠ+ⅢP經(jīng)甘氨酸沉淀得到的Fg粗制品分別進行了離子交換和疏水層析純化條件的優(yōu)化,離子交換劑先后使用過兩種,Q Sepharose HP（GE）,Q Sepharose XL... 

【文章來源】：武漢生物制品研究所湖北省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

RGPS不同保存時間和環(huán)境的SDS-PAGE（還原）分析（FⅠP）

0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.00.040.060.080.100.120.14Proteinconcentration(mg/ml)Storagetime(Day)Sample-SBSample-NOSB圖 6 RGPS（FⅠ+ⅢP）穩(wěn)定時間折線圖Fig. 6. Curve of RGPS（FⅠ+ⅢP）shelf timeSample-SB：用樣品保存液保存的樣品；Sample-NOSB：用 Buffer A 保存的樣品

圖 9 QSHP 分離 Fg 收集的樣品 SDS-PAGE（還原）分析（FⅠPactions analysis of Fg preparation with QSHP by reduced SDS-PAGES；3，穿流峰 1；4，穿流峰 2；5，洗脫峰B20；6，洗脫峰B308，洗脫峰B100；9，GPS；M，Maker；銀染于 QSHP 柱，經(jīng)階段洗脫后，結(jié)果見圖 8，將收集 顯示目的蛋白主要存在于穿流峰1（泳道 3），穿 7），綜合圖 8 各峰的面積和圖 9 目的蛋白的峰（泳道 3，4）中。優(yōu)化及 Fg 制備制備 Fg于 BS4FF 柱，經(jīng) 11 個柱體積線性梯度洗脫后，的樣品 SDS-PAGE，結(jié)果見圖 11，凝固活力、純

【參考文獻】：
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本文編號：3282988