目的：研究丙型肝炎病毒（hepatitis C virus, HCV）1b基因型核心蛋白（core）對(duì)Huh7細(xì)胞Wnt/β-catenin/TCF信號(hào)通路及細(xì)胞凋亡的影響，以初步探索1b基因型HCV核心蛋白與Wnt/β-catenin/TCF信號(hào)通路及細(xì)胞凋亡的關(guān)系。方法：通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)將重組后的真核表達(dá)載體pcDNA3.1（-）/HCV-1b-core瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Hun7細(xì)胞（pcDNA3.1（-）-C組），RT-PCR及Western Blot檢測(cè)其mRNA和蛋白的表達(dá)；MTT、RT-PCR、Western Blot、雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)分別檢測(cè)成功轉(zhuǎn)染pcDNA3.1（-）/HCV-1b-core后Huh7細(xì)胞的增殖、β-catenin mRNA和蛋白的表達(dá)，以及TCF轉(zhuǎn)錄因子活性；流式細(xì)胞術(shù)和Western Blot分別檢測(cè)血清饑餓誘導(dǎo)條件下成功轉(zhuǎn)染pcDNA3.1（-）/HCV-1b-core Huh7細(xì)胞的凋亡和Caspase-3的表達(dá)；以轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的pcDNA3.1（-）組、空白對(duì)照組Huh7細(xì)胞作為對(duì)照。結(jié)果：1、重組質(zhì)粒pcDNA3.1（-）/HCV-1b-core瞬時(shí)轉(zhuǎn)... 

【文章來(lái)源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：46 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

RT-PCR鑒定HCVcoremRNA的表達(dá)

圖 1：RT-PCR 鑒定 HCVcore mRNA 的表達(dá)注：1.pcDNA3.1(-)-C 組 2.pcDNA3.1(-)組 3.空白對(duì)照組真核表達(dá)載體 pcDNA3.1(-)/HCV-1b-core 成功轉(zhuǎn)染 Huh7 細(xì)胞后，RT-PCR顯示空白對(duì)照組、pcDNA3.1(-)組、pcDNA3.1(-)-C 組 β-catenin mRNA 相對(duì)量分別為：0.326±0.017、0.362±0.029、0.625±0.023，統(tǒng)計(jì)顯示三組間 β-cateRNA 相對(duì)表達(dá)量方差齊（P >0.1），β-catenin mRNA 相對(duì)表達(dá)量與 pcDNA3.1和空白對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P <0.01）,表明 HCV core 轉(zhuǎn)染 Hu胞后能夠上調(diào) β-catenin mRNA 的表達(dá)水平(如圖 2)。

.MTT 法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖MTT 法于 12h、24h、36h、48h、60h、72h 不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定空白對(duì)照組、cDNA3.1(-)組、pcDNA3.1(-)-C 組相應(yīng)的 OD 值(如表 1)，根據(jù) OD 值繪制各組uh7 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(如圖 3)。表 1 MTT 法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)各組細(xì)胞 OD 值（X±S）組別 12h 24h 36h 48h 60h 72h空白對(duì)照組 0.25±0.04 0.31±0.02 0.45±0.05 0.54±0.03 0.65±0.01 0.72±0.02pcDNA3.1(-)組 0.27±0.06 0.30±0.03 0.42±0.05 0.53±0.04 0.63±0.03 0.69±0.06cDNA3.1(-)-C 組 0.29±0.03 0.45±0.04* 0.62±0.04* 0.75±0.05* 0.86±0.02* 0.95±0.04*注：同一時(shí)間點(diǎn)，與 pcDNA3.1(-)組和空白對(duì)照組相比，*P<0.01。

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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本文編號(hào)：3274108