IL-12通過增強T細(xì)胞和NK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷活性而在先天性免疫和獲得性抗腫瘤免疫中均發(fā)揮著重要作用，樹突狀細(xì)胞（DC）是機體內(nèi)一種有效的抗原提呈細(xì)胞。本研究利用已知的分別能被CD4⁺T和CD8⁺T淋巴細(xì)胞所識別的抗原多肽表位，觀察IL-12基因轉(zhuǎn)染入DC后，在DC呈遞抗原局部較高水平的IL-12表達(dá)，對Th細(xì)胞發(fā)育分化和CTL功能的影響，以探討IL-12基因轉(zhuǎn)染DC在負(fù)載上相應(yīng)腫瘤抗原后作為治療性腫瘤疫苗的可能性。采用RT-PCR從臍血DC中克隆了人IL-12p40基因。序列分析顯示第210位密碼子具有獨特的序列特征，是GCC（Ala）而非GTC（Val）。利用此基因與NKSFp35（購自ATCC）構(gòu)建人了人IL-12基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒雙亞基共表達(dá)載體，在其轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞后表達(dá)出了具有生物學(xué)活性的IL-12，Western Blot分析顯示有特異性蛋白條帶。提示IL-12p40基因可能存在著多態(tài)性。采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，將這一表達(dá)載體轉(zhuǎn)染經(jīng)FIt-3L、SCF和GM-CSF刺激后進入到細(xì)胞增殖周期中的DC前體細(xì)胞，隨后采用GM-CSF、IL-4和... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

RT一PCR擴增人IL一12婦ocNDA片段的電泳圖譜

FIG.l一7:ConstruetionofreeombinanthumanIL一12ertroviralbieistronieveetorPL35P40SN圖1一7:重組人IL一12逆轉(zhuǎn)錄病毒雙亞基共表達(dá)載體的構(gòu)建1.InsertionofP35:PLXPXSNwaseutbyEeoRI，blunt一endedbyKleno，wandtheneleavedbyNotl.P35NKSFwaseutbySall，blunt一endedbyKleno，wandtlleneleavedbyNotltoreleasedthe1.3kbP35genetobeligatedintothesitesuPstreamofIRES.2.InsertionofP40:ThereeombinantveetoreontainingP35wascutbySall，blunt一endedbyKleno，wandthenelevaedbyXhol.PhDCP40waseutbyBamHI，blunt一endedbyKIeno，wandtheneleavedbyXlloltoreleasedtheP40rfagment，whieh15tllenligatedintothesitesdownstreamofIREStoeomPletetheeonstruetion.25

trietionnadPCRProfiieofreeombinnat人IL一12基因表達(dá)載體的PCR及酶pressionvectorpLxpxSNdigestedbyEthumnaIL一12exPressionveetorPLbp，，a76obps，a’25obp，，anda內(nèi)obpseationofPL35P40SNbyusingsPeeifie0bPsbnadcationofPL35P40SNbyusingsPeeifie0bPsbanddlll+EeoRI

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]北方漢族人群HLA-A2亞型分布及p53的合成肽體外誘導(dǎo)CTL反應(yīng)[J]. 侯亞非,孫宗棠,曲春楓,吳志遠(yuǎn).  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 1999(01)
[2]人IL-12的克隆、表達(dá)及生物活性的鑒定[J]. 曲春楓,孫宗棠.  中國免疫學(xué)雜志. 1999(01)
[3]白細(xì)胞介素12基因轉(zhuǎn)染抑制B16細(xì)胞成瘤性及轉(zhuǎn)移性的研究[J]. 付堅,鄭杰,方偉崗,吳秉銓,吳曉由,江峰.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 1998(08)



本文編號：3262314