IL-12通過增強T細胞和NK細胞對腫瘤細胞的殺傷活性而在先天性免疫和獲得性抗腫瘤免疫中均發(fā)揮著重要作用，樹突狀細胞（DC）是機體內(nèi)一種有效的抗原提呈細胞。本研究利用已知的分別能被CD4⁺T和CD8⁺T淋巴細胞所識別的抗原多肽表位，觀察IL-12基因轉(zhuǎn)染入DC后，在DC呈遞抗原局部較高水平的IL-12表達，對Th細胞發(fā)育分化和CTL功能的影響，以探討IL-12基因轉(zhuǎn)染DC在負載上相應腫瘤抗原后作為治療性腫瘤疫苗的可能性。采用RT-PCR從臍血DC中克隆了人IL-12p40基因。序列分析顯示第210位密碼子具有獨特的序列特征，是GCC（Ala）而非GTC（Val）。利用此基因與NKSFp35（購自ATCC）構(gòu)建人了人IL-12基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒雙亞基共表達載體，在其轉(zhuǎn)導細胞后表達出了具有生物學活性的IL-12，Western Blot分析顯示有特異性蛋白條帶。提示IL-12p40基因可能存在著多態(tài)性。采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，將這一表達載體轉(zhuǎn)染經(jīng)FIt-3L、SCF和GM-CSF刺激后進入到細胞增殖周期中的DC前體細胞，隨后采用GM-CSF、IL-4和... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

RT一PCR擴增人IL一12婦ocNDA片段的電泳圖譜

FIG.l一7:ConstruetionofreeombinanthumanIL一12ertroviralbieistronieveetorPL35P40SN圖1一7:重組人IL一12逆轉(zhuǎn)錄病毒雙亞基共表達載體的構(gòu)建1.InsertionofP35:PLXPXSNwaseutbyEeoRI，blunt一endedbyKleno，wandtheneleavedbyNotl.P35NKSFwaseutbySall，blunt一endedbyKleno，wandtlleneleavedbyNotltoreleasedthe1.3kbP35genetobeligatedintothesitesuPstreamofIRES.2.InsertionofP40:ThereeombinantveetoreontainingP35wascutbySall，blunt一endedbyKleno，wandthenelevaedbyXhol.PhDCP40waseutbyBamHI，blunt一endedbyKIeno，wandtheneleavedbyXlloltoreleasedtheP40rfagment，whieh15tllenligatedintothesitesdownstreamofIREStoeomPletetheeonstruetion.25

trietionnadPCRProfiieofreeombinnat人IL一12基因表達載體的PCR及酶pressionvectorpLxpxSNdigestedbyEthumnaIL一12exPressionveetorPLbp，，a76obps，a’25obp，，anda內(nèi)obpseationofPL35P40SNbyusingsPeeifie0bPsbnadcationofPL35P40SNbyusingsPeeifie0bPsbanddlll+EeoRI

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]人IL-12的克隆、表達及生物活性的鑒定[J]. 曲春楓,孫宗棠.  中國免疫學雜志. 1999(01)
[3]白細胞介素12基因轉(zhuǎn)染抑制B16細胞成瘤性及轉(zhuǎn)移性的研究[J]. 付堅,鄭杰,方偉崗,吳秉銓,吳曉由,江峰.  中華醫(yī)學雜志. 1998(08)



本文編號：3262314