發(fā)布時(shí)間：2021-07-02 07:11

　　血友病乙是由凝血因子Ⅸ（FactorⅨ,FⅨ）缺乏或功能缺陷導(dǎo)致的出血性疾病,為伴X染色體隱性遺傳病。小鼠模型對于血友病乙的研究具有十分重要的意義,而基因組編輯技術(shù)又為小鼠模型的構(gòu)建提供了一種快捷而且高效的途徑。本文利用CRISPR/Cas系統(tǒng),在小鼠FⅨ基因第8外顯子上選擇靶位點(diǎn),將Cas9 m RNA和帶有靶位點(diǎn)的sg RNA顯微注射到C57BL/6品系小鼠的受精卵中,獲得基因修飾的小鼠。利用高分辨率熔解曲線分析（High resolution melting,HRM）技術(shù)進(jìn)行精確基因分型,并通過測序驗(yàn)證,在60只小鼠中,總共有51只小鼠的靶位點(diǎn)發(fā)生了突變,突變率高達(dá)85%,其中雄鼠的突變率為79.5%,雌鼠的突變率為95.2%;未檢測到非目標(biāo)位置的基因編輯脫靶。凝血活性實(shí)驗(yàn)顯示,突變小鼠的FⅨ活性值（FactorⅨcoagulant activity,FⅨ:C）是非突變小鼠的6.82%,大大低于非突變小鼠,表明突變小鼠的凝血活性缺失。本研究表明,利用CRISPR/Cas系統(tǒng)成功構(gòu)建了人類血友病乙遺傳病小鼠模型。 

【文章來源】：遺傳. 2015,37(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

HA：非突雜合突變位點(diǎn)進(jìn)行鼠基因組的熔解曲型基因組HRM基因分型突變小鼠的熔解變小鼠的熔解曲行HRMA檢測得組(未混入野生型曲線，紅色代表

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]應(yīng)用HRM技術(shù)對CYP2C19*2和CYP2C19*3進(jìn)行雙重SNP分型[J]. 曹春鴿,孫海燕,周芳芳,王詩銘,陳紅巖,盧大儒.  遺傳. 2013(07)



本文編號：3260007