目的探究低氧狀態(tài)下骨細(xì)胞對(duì)破骨細(xì)胞形成的作用及其機(jī)制。方法用去鐵胺甲磺酸（DFO）刺激骨細(xì)胞系MLO-Y4建立體外低氧骨細(xì)胞培養(yǎng)體系。CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DFO對(duì)MLO-Y4細(xì)胞增殖活性的影響;采用DFO處理后的MLO-Y4細(xì)胞培養(yǎng)液制備條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞分化,行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色檢測(cè);利用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)、細(xì)胞免疫熒光和蛋白質(zhì)印跡（Western blot）檢測(cè)DFO作用下MLO-Y4表達(dá)低氧誘導(dǎo)因子（HIF）-1α與核因子κB受體活化因子配體（RANKL）的情況;檢測(cè)HIF-1αsiRNA轉(zhuǎn)染對(duì)MLO-Y4表達(dá)HIF-1α和RANKL的影響。結(jié)果 100μmol·L^-1 DFO作用24 h時(shí)MLO-Y4增殖活性升高,之后隨著時(shí)間延長(zhǎng)細(xì)胞增殖活性下降（P<0.01）。加入可溶性RANKL后,低氧組可見破骨細(xì)胞形成明顯增加（P<0.001）。100μmol·L^-1 DFO作用下,HIF-1αmRNA表達(dá)穩(wěn)定,RANKL mRNA的表達(dá)隨時(shí)間明顯變化,24 h時(shí)最高（P<0.01）;HIF... 

【文章來(lái)源】：華西口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2019,37(05)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象及主要試劑
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)與處理
    1.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)(cell counting kit-8,CCK-8)實(shí)驗(yàn)
    1.4 條件培養(yǎng)基制備和破骨細(xì)胞誘導(dǎo)
    1.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    1.6 細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)
    1.7 Western blot分析
    1.8 統(tǒng)計(jì)分析
2 結(jié)果
    2.1 低氧對(duì)MLO-Y4細(xì)胞增殖的影響
    2.2 低氧狀態(tài)下siRNA轉(zhuǎn)染對(duì)破骨細(xì)胞生成的影響
    2.3 低氧對(duì)MLO-Y4細(xì)胞表達(dá)HIF-α、RANKL mRNA及蛋白的影響
    2.4 低氧狀態(tài)下si RNA轉(zhuǎn)染對(duì)MLO-Y4細(xì)胞表達(dá)HIF-α、RANKL的影響
3 討論



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