目的探究低氧狀態(tài)下骨細胞對破骨細胞形成的作用及其機制。方法用去鐵胺甲磺酸（DFO）刺激骨細胞系MLO-Y4建立體外低氧骨細胞培養(yǎng)體系。CCK-8實驗檢測DFO對MLO-Y4細胞增殖活性的影響;采用DFO處理后的MLO-Y4細胞培養(yǎng)液制備條件培養(yǎng)基誘導RAW264.7細胞分化,行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色檢測;利用實時熒光定量聚合酶鏈反應、細胞免疫熒光和蛋白質印跡（Western blot）檢測DFO作用下MLO-Y4表達低氧誘導因子（HIF）-1α與核因子κB受體活化因子配體（RANKL）的情況;檢測HIF-1αsiRNA轉染對MLO-Y4表達HIF-1α和RANKL的影響。結果 100μmol·L^-1 DFO作用24 h時MLO-Y4增殖活性升高,之后隨著時間延長細胞增殖活性下降（P<0.01）。加入可溶性RANKL后,低氧組可見破骨細胞形成明顯增加（P<0.001）。100μmol·L^-1 DFO作用下,HIF-1αmRNA表達穩(wěn)定,RANKL mRNA的表達隨時間明顯變化,24 h時最高（P<0.01）;HIF... 

【文章來源】：華西口腔醫(yī)學雜志. 2019,37(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實驗對象及主要試劑
    1.2 細胞培養(yǎng)與處理
    1.3 細胞計數(shù)(cell counting kit-8,CCK-8)實驗
    1.4 條件培養(yǎng)基制備和破骨細胞誘導
    1.5 實時熒光定量PCR
    1.6 細胞免疫熒光檢測
    1.7 Western blot分析
    1.8 統(tǒng)計分析
2 結果
    2.1 低氧對MLO-Y4細胞增殖的影響
    2.2 低氧狀態(tài)下siRNA轉染對破骨細胞生成的影響
    2.3 低氧對MLO-Y4細胞表達HIF-α、RANKL mRNA及蛋白的影響
    2.4 低氧狀態(tài)下si RNA轉染對MLO-Y4細胞表達HIF-α、RANKL的影響
3 討論



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