目的分析結(jié)核分枝桿菌感染對巨噬細(xì)胞糖酵解的影響和潛在機(jī)制。方法建立人型結(jié)核分枝桿菌H37Rv感染人巨噬細(xì)胞系U937細(xì)胞的體外模型,分別于感染后0、30、60和90 min檢測乳酸生成情況。根據(jù)不同處理方法將巨噬細(xì)胞U937分為感染組（結(jié)核分枝桿菌H37Rv感染60 min）、感染+SB203580[p38絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）特異性抑制劑]組、感染+小干擾RNA（siRNA）陰性對照組、感染+siRNA-6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶3（PFKFB3）組和空白對照組。采用實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）和免疫印跡法檢測各組細(xì)胞中PFKFB3。磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）的表達(dá)及腫瘤壞死因子（TNF）-α、白細(xì)胞介素（IL）-1β、IL-6、乳酸的生成情況。結(jié)果結(jié)核分枝桿菌可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞中PFKFB3的表達(dá),增加乳酸的生成量,感染60 min后乳酸水平達(dá)到最大值;給予SB203580干預(yù),可抑制感染后p-p38 MAPK和PFKFB3的表達(dá)。沉默巨噬細(xì)胞內(nèi)源性PFKFB3的表達(dá)可明顯拮抗結(jié)核分枝桿菌感染誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎性因子增加和糖酵解增強(qiáng)... 

【文章來源】：檢驗(yàn)醫(yī)學(xué). 2019,34(07)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 試劑
    1.2 人型結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)
    1.3 細(xì)胞培養(yǎng)及感染
    1.4 細(xì)胞分組處理
    1.5 各組細(xì)胞乳酸生成量檢測
    1.6 檢測各組細(xì)胞中促炎因子的分泌
    1.7 分析各組細(xì)胞PFKFB3 mRNA的表達(dá)
    1.8 分析各組細(xì)胞中PFKFB3和p38 MAPK磷酸化水平
    1.9 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞后乳酸生成量
    2.2 結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞后PFKFB3的表達(dá)量
    2.3 結(jié)核分枝桿菌激活p38 MAPK信號通路后巨噬細(xì)胞中PFKFB3表達(dá)量
    2.4 沉默巨噬細(xì)胞中PFKFB3明顯拮抗結(jié)核分枝桿菌感染后TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌
    2.5 沉默巨噬細(xì)胞中PFKFB3明顯抑制結(jié)核分枝桿菌感染誘導(dǎo)的糖酵解的增加
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]結(jié)核分枝桿菌與巨噬細(xì)胞相互作用的研究進(jìn)展[J]. 王靜嫻,楊春.  微生物與感染. 2010(03)



本文編號：3239104