目的構(gòu)建人真核翻譯起始因子3C（Eukaryotic Translation Initiation Factor 3 Subunit C,EIF3C）編碼區(qū)全長的真核表達載體,轉(zhuǎn)染FaDu人下咽鱗癌細胞系,為探討EIF3C的生物學(xué)功能奠定基礎(chǔ)。方法從人下咽鱗癌細胞系中提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄成cDNA后用特異性引物PCR擴增EIF3C基因編碼區(qū)全長（NM₀01037808.2）,雙酶切后將EIF3C基因編碼區(qū)全長克隆到載體pCMV-Blank上,構(gòu)建真核表達載體pCMV-EIF3C。轉(zhuǎn)染FaDu細胞系,real-timePCR和Western blot檢測EIF3C表達水平。將未加質(zhì)粒轉(zhuǎn)染FaDu細胞作為未加質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組,加質(zhì)粒pCMV-Blank作為pCMV-Blank轉(zhuǎn)染組,以及加質(zhì)粒pCMV-EIF3C作為pCMV-EIF3C轉(zhuǎn)染組。分別將pCMV-EIF3C轉(zhuǎn)染組EIF3C的mRNA和蛋白表達水平與未加質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組、pCMV-Blank轉(zhuǎn)染組進行比較,以及比較未加質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組和pCMV-Blank轉(zhuǎn)染組。通過生物信息學(xué)網(wǎng)站和軟件分析人EIF3C氨基酸序列的理化性質(zhì)、... 

【文章來源】：西部醫(yī)學(xué). 2019,31(09)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 一般資料
        1.1.1 質(zhì)粒、菌株及細胞系
        1.1.2 工具酶及主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 目的基因PCR擴增
        1.2.2 真核表達載體pCMV-EIF3C構(gòu)建
        1.2.3 FaDu細胞的體外轉(zhuǎn)染
        1.2.4 轉(zhuǎn)染細胞EIF3C表達情況鑒定
        1.2.5 EIF3C蛋白生物信息學(xué)分析
    1.3 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 人EIF3C基因的克隆
    2.2 真核表達載體pCMV-EIF3C的構(gòu)建及鑒定
    2.3 轉(zhuǎn)染細胞EIF3C的mRNA和蛋白表達情況檢測
    2.4 人EIF3C的理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)分析
3 討論
4 結(jié)論



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