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人Fcα/μR的表達與功能的初步研究

發(fā)布時間:2021-06-11 05:37
  人Fcα/μR是IgA和IgM的Fc受體,能與多聚體IgM/IgA結(jié)合,因此可能在系統(tǒng)免疫和粘膜免疫中都有重要的作用。其基因位于1號染色體1q32,毗鄰其它FcR基因,包括Poly Immunoglobulin Receptor(pIgR)。經(jīng)蛋白序列分析,Fcα/μR是Ⅰ型跨膜蛋白,其膜外區(qū)有三個結(jié)構(gòu)域組成,一個短的EC1區(qū)、一個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域的EC2區(qū)和一個特殊的EC3區(qū)。EC2區(qū)與pIgR胞外第一個結(jié)構(gòu)域(D1)同源性很高,預測是結(jié)合IgM/IgA的區(qū)域。據(jù)報道,人Fcα/μR表達在扁桃體生發(fā)中心的濾泡樹突狀細胞、腎遠曲小管和小腸潘氏細胞。為了研究Fcα/μR的性質(zhì),需要得到正確折疊的受體,而原核細胞表達的Fcα/μR以包涵體形式存在,難以以復性方式得到正確折疊的可溶性受體。為此我們嘗試了用酵母和哺乳細胞真核表達Fcα/μR。在畢赤酵母中分泌表達的人Fcα/μR的膜外區(qū)在C端帶MycHis6標簽,可以用Ni柱親和純化。經(jīng)Western Blot鑒定,得到多個特異性條帶(32-47、50、80、140kDa),我們推測32-47kDa條帶是部分降解的目的蛋... 

【文章來源】:北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】:129 頁

【學位級別】:博士

【部分圖文】:

人Fcα/μR的表達與功能的初步研究


人Fc側(cè)林R基因在染色體上的定位及鄰近的Fc受體

序列,R基因,內(nèi)含子,外顯子


圖1.人Fc側(cè)林R基因在染色體上的定位及鄰近的Fc受體Fea單R全長eDNA序列(如圖2)由69bps’一UTR(untranslatedregion)、1閱讀框和3’一UTR(含polyA)組成。人Fc留林R編碼基因全長含有6個外顯子(ECZ、Ee3、TM和CY)和6個內(nèi)含子。外顯子sP很短,只有61bp,編碼起To和giJ’導膚的大部分序列;外顯子ECI(144bp)、ECZ(339bp)和EC3(編碼一個胞外結(jié)構(gòu)域,其中ECZ為免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域;外顯子TM(11g是疏水氨基酸的跨膜區(qū);外顯子CY(374bP)編碼一個很短的胞質(zhì)尾部。Fca它選擇性剪切形式,位于EC3與TM外顯子間的內(nèi)含子5的第一個密碼子即碼TAA,當此內(nèi)含子沒有被切掉,跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)則會丟失,從而形成一個的Fca單R。Fca單R基因在腎小球系膜細胞中存在著膜型和可溶型兩種不同位,且這兩種轉(zhuǎn)錄形式均可被IL一1上調(diào)22。

糖基化位點,小鼠,結(jié)構(gòu)示意圖,氨基酸殘基


膚鏈由5犯個氨基酸殘基組成,其中N端10個氨基酸殘基組熟時在前導膚末位的丙氨酸殘基和成熟膚鏈第一位的亮氨成熟的含有522個氨基酸殘基的I型跨膜糖蛋白。Fca單R胞結(jié)構(gòu)域(EC2)和兩個其它結(jié)構(gòu)域組成,有2個可能發(fā)生N一朧氨酸(Csl,C82,C98,C107,C150和C153)。其中除于免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域,維持p折疊三明治結(jié)構(gòu)的二硫鍵相連的是20個疏水氨基酸殘基組成的跨膜區(qū)(其中不含有)和61個氨基酸殘基組成的胞內(nèi)區(qū)。人Fca單R的胞內(nèi)區(qū)不,也不含有酪氨酸位點,但是含有絲氨酸和蘇氨酸位點。的胞外區(qū)有4個可能發(fā)生N一糖基化修飾的位點,胞內(nèi)區(qū)有一其它結(jié)構(gòu)與人Fca單R相似(如圖3)。


本文編號:3223928

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