發(fā)布時間：2021-06-10 07:07

　　目的:模擬體內(nèi)組織彈性微環(huán)境,構(gòu)建液晶（OPC/PU）復(fù)合基底,探究復(fù)合基底彈性模量及液晶相區(qū)尺寸對大鼠骨髓間充值干細胞（rBMSCs）成骨分化的影響。方法:通過調(diào)節(jié)復(fù)合膜中液晶含量,制備不同彈性模量的液晶復(fù)合基底。采用偏光顯微鏡觀察復(fù)合基底表面液晶相區(qū)結(jié)構(gòu);萬能測試儀測量復(fù)合基底彈性模量;激光共聚焦顯微鏡觀察rBMSCs的鋪展、極化和骨架排列;CCK-8法檢測rBMSCs的增殖速率;real-time PCR檢測復(fù)合膜上的成骨分化標(biāo)記物Ⅰ型膠原和骨橋蛋白的mRNA表達。結(jié)果:（1）復(fù)合基底中液晶含量增加,液晶相區(qū)數(shù)量及尺寸增加,復(fù)合基底的彈性模量降低,但仍保持在MPa數(shù)量級。（2）rBMSCs在液晶含量較低的OPC10-PU和OPC30-PU表面呈現(xiàn)較好的初始黏附、鋪展和增殖。（3）成骨誘導(dǎo)初期及中期,rBMSCs在OPC10-PU上展示較高的Ⅰ型膠原和骨橋蛋白基因表達;誘導(dǎo)培養(yǎng)后期,rBMSCs在OPC30-PU和OPC50-PU上呈現(xiàn)出Ⅰ型膠原和骨橋蛋白基因的高表達,成骨分化的基因表達重點也從早中期的Ⅰ型膠原主要表達轉(zhuǎn)變?yōu)楹笃诘墓菢虻鞍字饕磉_。結(jié)論:復(fù)合基底中液晶含量較低時,r... 

【文章來源】：中國病理生理雜志. 2015,31(08)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

PU和復(fù)合膜在37℃的偏光顯微鏡圖

性模量依次為13．3、11．7、8．8和6．3MPa。雖然黏彈性軟物質(zhì)液晶的加入會降低基質(zhì)材料PU的強度，但從測試數(shù)據(jù)看，OPC/PU復(fù)合膜仍然有較高的彈性模量，保持在MPa數(shù)量級。Figure2．ElasticmodulusofPUandcompositemembranes．Mean±SD．n=3．圖2PU和復(fù)合膜的彈性模量圖3細胞骨架觀察圖3是rBMSCs在PU及復(fù)合膜上培養(yǎng)24h的骨架染色的激光共聚焦照片。如圖所示，在PU及所有復(fù)合膜上，細胞均排列良好，并呈現(xiàn)與細胞極化方向相同的應(yīng)力纖維，且細胞外圍均有較長穩(wěn)定的邊緣，表明rBMSCs在這些基底上均呈現(xiàn)較好的黏附性。從rBMSCs長徑比和面積的定量分析上來看，OPC10-PU和OPC30-PU基底上rBMSCs的長徑比略大于PU和OPC50-PU;此外，rBMSCs在OPC10-PU和OPC30-PU基底上具有較大的鋪展面積。這些觀察結(jié)果表明，液晶復(fù)合基底中液晶含量不同，rBMSCs與基底發(fā)生相互作用的程度亦不相同［6］。4rBMSCs在PU及復(fù)合膜上的增殖速率細胞培養(yǎng)1d后，PU和復(fù)合膜上的細胞增殖情況基本相同;培養(yǎng)3d后，rBMSCs在PU、OPC10-PU和OPC30-PU上的增殖率均有所增加，而在OPC50-PU上的增殖率略有減少，見圖4。Figure3．CytoskeletonrearrangementofrBMSCsondifferentcompositemembranes．Mean±SD．n=10．*P＜0.05vsPU．圖3rBMSCs在不同復(fù)合膜上的骨架重排·1486·

蟣澩?所有檢測基因的熔解曲線均呈現(xiàn)單峰，表明擴增的特異性片段相同，引物的特異性高。在培養(yǎng)基中加入地塞米松、維生素C和甘油磷酸鈉誘導(dǎo)分化培養(yǎng)7d后，可觀察到，種板于PU、OPC30-PU和OPC50-PU上rBMSCs的Ⅰ型膠原mＲNA表達未呈現(xiàn)顯著差異，然而，在OPC10-PU上，Ⅰ型膠原表達量明顯高于PU和其它2個復(fù)合基底上的;OPC10-PU上rBMSCs的骨橋蛋白mＲNA表達量相對而言仍保持最高水平，隨著液晶含量的增加，復(fù)合基底上rBM-SCs的骨橋蛋白mＲNA表達量呈現(xiàn)明顯的遞減趨勢，表明OPC10-PU基底較有利于rBMSCs的初期成骨分化，見圖5。誘導(dǎo)培養(yǎng)14d后，在OPC10-PU基底上的rBM-SCs的Ⅰ型膠原和骨橋蛋白的表達量遠遠高于PU及其它2個復(fù)合膜上的，且隨著液晶含量的增加，rBMSCs的Ⅰ型膠原和骨橋蛋白的mＲNA表達量明顯下降。與誘導(dǎo)培養(yǎng)7d相比，rBMSCs在OPC10-PU基底上的Ⅰ型膠原和骨橋蛋白的表達量亦有大幅度提高。表明在初期及中期誘導(dǎo)培養(yǎng)過程中，rBMSC在OPC10-PU基底表現(xiàn)出很強的Ⅰ型膠原和骨橋蛋白表達。誘導(dǎo)培養(yǎng)21d后，不同液晶復(fù)合基底上rBMSCs的Ⅰ型膠原和骨橋蛋白的mＲNA表達發(fā)生了巨大的變化。相對于其它2個基底，OPC30-PU和OPC50-PU上的rBMSCs呈現(xiàn)出Ⅰ型膠原和骨橋蛋白mＲNA的高表達，其中OPC30-PU上2種mＲNA的表達量略高。表明OPC-30-PU和OPC-50-PU基底可促進rBMSCs后期的成骨分化，見圖5。Figure5．ExpressionofcollagenⅠandOPNwasexaminedusingreal-timePCＲ．Mean±SD．n=3．*P＜0.05，＊＊P＜0.01vsPU．圖5復(fù)合膜上Ⅰ型膠原及骨橋蛋白mＲNA表達結(jié)果·1487·


本文編號：3221927