發(fā)布時間：2021-06-09 08:32

　　目的對檢測重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（recombinant human granulocyte macrophage colony stimulating factor,rh GM-CSF）生物學(xué)活性的TF-1細(xì)胞/MTT比色法進(jìn)行優(yōu)化及驗證。方法以rh GM-CSF依賴細(xì)胞株TF-1為靶細(xì)胞,采用MTT比色法測定rh GM-CSF生物學(xué)活性,對比色法中裂解液種類、裂解時間、細(xì)胞濃度、MTT作用時間等進(jìn)行優(yōu)化,并對優(yōu)化后的方法進(jìn)行準(zhǔn)確度和精密度驗證。結(jié)果優(yōu)化后的TF-1細(xì)胞/MTT比色法:將供試品及標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至18 IU/ml,做2倍系列稀釋,共8個稀釋度,50μl/孔;加入6×10⁵個/ml TF-1細(xì)胞懸液,50μl/孔,37℃培養(yǎng)48⁵2 h;加入MTT溶液,20μl/孔,37℃培養(yǎng)5 h;加入15%SDS裂解液,150μl/孔,裂解過夜,檢測A570值。3種不同濃度的rh GM-CSF標(biāo)準(zhǔn)品活性測定結(jié)果回收率為104%;rh GM-CSF標(biāo)準(zhǔn)品6次檢測活性平均值為18.6 IU/ml,變異系數(shù)為5.37%;rh GM-CSF標(biāo)... 

【文章來源】：中國生物制品學(xué)雜志. 2015,28(12)CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

不同細(xì)胞濃度作用時TF-1細(xì)胞的增殖曲線

不同裂解液作用1h（A，B）和16h（C，D）時TF-1細(xì)胞增殖曲線

加入MTT后不同時間測定的TF-1細(xì)胞增殖曲線

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3220248