目的篩選并鑒定可用于實(shí)驗(yàn)室快速檢測副溶血性弧菌的適配體序列。方法利用全菌SELEX技術(shù),通過人工合成全長86 bp、中間含40 bp隨機(jī)核苷酸序列的單鏈DNA文庫,篩選與副溶血性弧菌高效結(jié)合的適配體,對候選適配體序列進(jìn)行特異性分析,并評估其二級結(jié)構(gòu)和Kd值。結(jié)果第4輪篩選即出現(xiàn)比較明顯的產(chǎn)物富集,繼續(xù)篩選至第12輪結(jié)束。經(jīng)克隆和測序后得到5條候選適配體序列（F2、F5、F6、F19、F30）,它們與副溶血性弧菌的結(jié)合率分別為68.8%,68.8%,73.1%,65.2%和72.7%;特異性實(shí)驗(yàn)顯示,5條候選適配體均能與副溶血性弧菌高效結(jié)合,與5種其它常見致病菌則結(jié)合不明顯;用DNA folding form對5條候選核酸適配體序列進(jìn)行二級結(jié)構(gòu)模擬,結(jié)果顯示,其二級結(jié)構(gòu)以莖環(huán)（凸環(huán)和圓環(huán)）為主,莖環(huán)結(jié)構(gòu)中的莖多由G-C配對組成;采用熒光分析法對5條候選適配體的Kd值進(jìn)行分析測定,其對靶細(xì)菌的解離常數(shù)分別為15.88、15.24、9.13、4.12和25.39 nM。結(jié)論全菌SELEX技術(shù)可用于副溶血性弧菌適配體篩選,5條候選適配體與靶細(xì)菌結(jié)合力強(qiáng),特異性高。 

【文章來源】：中國公共衛(wèi)生. 2019,35(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁


本文編號：3213994