目的 制備豚鼠抗α-毒素血清、純化抗重組金黃色葡萄球菌α-毒素的IgG并應用十二烷基硫酸鈉（SDS）-聚丙烯酰胺凝膠（PAGE）電泳檢測,檢測酵母表達α-毒素情況。方法 免疫豚鼠,給豚鼠靜脈注射重組α-毒素,制備抗α-毒素血清,利用HiTrap protein A HP純化抗重組金黃色葡萄球菌α-毒素IgG,SDS-PAGE非還原性電泳檢測純化的IgG。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）和免疫熒光共聚焦檢測酵母表達α-毒素情況。結果 成功獲得了豚鼠抗α-毒素血清及所需的抗α-毒素抗體。非還原性電泳觀察到未純化的血清中抗α-毒素抗體濃度較低,穿透峰中抗α-毒素抗體含量較少,洗脫峰中抗α-毒素抗體的純度約為85%。ELISA法檢測發(fā)現(xiàn),轉化子1、2號與陰性對照組相比較,基本可以判斷轉化子經過誘導表面展示了α-毒素；免疫熒光共聚焦檢測發(fā)現(xiàn),經過抗α-毒素抗體染色,1號酵母轉化子表面發(fā)出綠色熒光而未誘導培養(yǎng)基的細胞表面沒有熒光。結論 金黃色葡萄球菌α-毒素在酵母表面展示成功,可以進一步應用于生物醫(yī)學臨床或學術研究領域,同時可為研發(fā)酵母展示疫苗提供可靠的鑒定方法。 

【文章來源】：中國醫(yī)師進修雜志. 2019,(10)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【參考文獻】：
期刊論文
[1]絲裂原活化蛋白激酶信號轉導通路在金黃色葡萄球菌α-毒素所致人外周血單核細胞凋亡中的作用[J]. 佡劍非,李麗,李乃靜,白雪,王佳賀.  新鄉(xiāng)醫(yī)學院學報. 2014(04)
[2]酵母表面展示系統(tǒng)研究進展[J]. 郭波,謝佩蓉,鄒強,鄭萍.  生物化學與生物物理進展. 2002(01)
[3]海洋哈維氏弧菌溶血素蛋白在酵母菌細胞表面上的展示及其活性的測定[J]. 朱開玲,池振明,梁麗琨,吳龍飛.  高技術通訊. 2007 (01)

博士論文
[1]高致病性禽流感H5N1康復者體內針對HA的抗體的表位研究[D]. 左騰.清華大學 2015

碩士論文
[1]鼠尾草精油納米脂質體對金黃色葡萄球菌生物膜的控制釋放研究[D]. 周慧.江蘇大學 2016



本文編號：3187988