目前關(guān)于富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白（SPARC）的功能研究主要集中在對腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移和預(yù)后的影響,而對造血發(fā)育影響的研究較少。5q-骨髓增生異常綜合征（5q-MDS）患者骨髓細(xì)胞中SPARC的表達(dá)水平降低；免疫調(diào)節(jié)劑lenalidomide治療5q-MDS患者,能抑制惡性幼紅細(xì)胞的增殖,同時SPARC的表達(dá)上調(diào)。此外,SPARC缺失小鼠對脂多糖（LPS）刺激的反應(yīng)降低,并且骨髓中CD19+B淋巴細(xì)胞數(shù)量減少,提示SPARC可能參與調(diào)節(jié)紅細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的發(fā)育。本研究以SPARC缺失小鼠為研究對象,研究SPARC在紅細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞發(fā)育中的作用。本研究包括三部分,分述如下：第一章SPARC在紅細(xì)胞發(fā)育過程中的作用及機(jī)理研究目的：分析SPARC缺失小鼠體內(nèi)紅細(xì)胞的發(fā)育,并探討SPARC影響紅細(xì)胞發(fā)育的機(jī)理；研究SPARC蛋白對人紅細(xì)胞發(fā)育的影響。方法：采用血液分析儀,流式細(xì)胞技術(shù),體外集落培養(yǎng)和骨髓移植技術(shù),分析SPARC缺失小鼠體內(nèi)紅細(xì)胞的發(fā)育；采用磁珠分選臍血CD34+細(xì)胞,體外集落培養(yǎng)和體外紅細(xì)胞誘導(dǎo)分化技術(shù),研究SPARC蛋白對人紅細(xì)胞發(fā)育的影響。結(jié)果：1、SPARC缺失小鼠外周... 

【文章來源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
專業(yè)名詞縮寫中英文對照表
第一章 SPARC在紅細(xì)胞發(fā)育過程中的作用及機(jī)理研究
    1.1 材料
        1.1.1 實驗動物
        1.1.2 耗材
        1.1.3 解剖器械
        1.1.4 培養(yǎng)基和因子
        1.1.5 檢測試劑
        1.1.6 儀器設(shè)備
    1.2 方法
        1.2.1 小鼠基因型鑒定
        1.2.2 Western blotting分析
        1.2.3 外周血分析
        1.2.4 制備骨髓細(xì)胞懸液
        1.2.5 制備脾臟細(xì)胞懸液
        1.2.6 流式分析骨髓細(xì)胞
        1.2.7 流式分析脾臟細(xì)胞
        1.2.8 小鼠骨髓細(xì)胞體外集落培養(yǎng)
        1.2.9 人臍CD34+細(xì)胞體外集落培養(yǎng)
        1.2.10 脾臟集落形成單位
        1.2.11 蘇木素和伊紅染色
        1.2.12 骨髓細(xì)胞長期培養(yǎng)
        1.2.13 造血重建
        1.2.14 歸巢實驗
        1.2.15 免疫磁珠分選人臍CD34+細(xì)胞
        1.2.16 臍血CD34+細(xì)胞體外分化為紅細(xì)胞
        1.2.17 流式細(xì)胞技術(shù)檢測誘導(dǎo)分化產(chǎn)生的紅細(xì)胞
        1.2.18 聯(lián)苯胺染色
        1.2.19 凋亡分析
        1.2.20 統(tǒng)計學(xué)分析
    1.3 結(jié)果
        1.3.1 小鼠基因型的鑒定
        1.3.2 SPARC缺失小鼠體內(nèi)紅系祖細(xì)胞減少
        1.3.3 SPARC缺失小鼠脾臟造血活躍
        1.3.4 SPARC缺失型BMCs的體外造血分化能力降低
        1.3.5 SPARC缺失型骨髓造血微環(huán)境支持紅系造血的能力受損
        1.3.6 SPARC缺失不影響造血細(xì)胞的歸巢
        1.3.7 重組SPARC蛋白促進(jìn)臍血CD34+細(xì)胞形成紅系祖細(xì)胞
        1.3.8 重組SPARC蛋白促進(jìn)人紅細(xì)胞分化過程中Hb的合成
    1.4 討論
    1.5 附圖
第二章 SPARC在B淋巴細(xì)胞發(fā)育過程中的作用及機(jī)理研究
    2.1 材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 培養(yǎng)基及細(xì)胞因子
        2.1.3 耗材與儀器設(shè)備
        2.1.4 檢測試劑
    2.2 方法
        2.2.1 流式分析外周血
        2.2.2 流式分析骨髓中B淋巴祖細(xì)胞
        2.2.3 流式分析骨髓中LSK細(xì)胞
        2.2.4 長期培養(yǎng)啟動細(xì)胞
        2.2.5 脾臟集落形成實驗(CFU-S_(12))
        2.2.6 體外pre-B集落培養(yǎng)
        2.2.7 收集骨髓基質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)液
        2.2.8 體外B淋巴細(xì)胞分化
        2.2.9 流式分析體外分化產(chǎn)生的B淋巴細(xì)胞
        2.2.10 B淋巴細(xì)胞增殖的檢測
        2.2.11 B淋巴細(xì)胞的凋亡檢測
        2.2.12 免疫熒光染色
        2.2.13 Real-time RT-PCR
        2.2.14 Western blotting
        2.2.15 基因芯片分析(Microarray analysis)
        2.2.16 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 SPARC缺失小鼠B淋巴細(xì)胞發(fā)育障礙
        2.3.2 SPARC缺失小鼠骨髓中B淋巴祖細(xì)胞減少
        2.3.3 SPARC缺失小鼠骨髓中原始造血細(xì)胞(LSK)減少
        2.3.4 SPARC缺失型造血微環(huán)境支持B淋巴細(xì)胞發(fā)育的能力受損
        2.3.5 SPARC缺失型BMSCs抑制B淋巴細(xì)胞的分化
        2.3.6 SPARC缺失型BMSCs抑制B淋巴細(xì)胞的增殖
        2.3.7 重組SPARC蛋白不直接影響B(tài)淋巴細(xì)胞的分化
        2.3.8 SPARC缺失型BMSCs分泌可溶性因子抑制B淋巴細(xì)胞的分化
        2.3.9 SPARC缺失不影響IL-7和SDF-1的表達(dá)
        2.3.10 基因芯片分析SPARC缺失型和野生型BMSCs
    2.4 討論
    2.5 附圖
第三章 脂肪細(xì)胞對B淋巴細(xì)胞發(fā)育影響的初步研究
    3.1 材料
        3.1.1 實驗動物及細(xì)胞系
        3.1.2 耗材、試劑和儀器設(shè)備
    3.2 方法
        3.2.1 OP9細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞
        3.2.2 油紅O染色
        3.2.3 RT-PCR
        3.2.4 收集脂肪細(xì)胞條件培養(yǎng)液
        3.2.5 B淋巴細(xì)胞體外分化
        3.2.6 流式分析B淋巴細(xì)胞
        3.2.7 體外pro-B和pre-B集落培養(yǎng)
        3.2.8 流式分析pro-B和pre-B集落
        3.2.9 Pro-B細(xì)胞分化為pre-B細(xì)胞
        3.2.10 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 OP9細(xì)胞誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞
        3.3.2 脂肪細(xì)胞抑制B淋巴細(xì)胞的分化
        3.3.3 脂肪細(xì)胞抑制B淋巴祖細(xì)胞的發(fā)育
        3.3.4 脂肪細(xì)胞條件培養(yǎng)液抑制B淋巴細(xì)胞的分化
        3.3.5 脂肪細(xì)胞抑制pro-B分化為pre-B細(xì)胞
    3.4 討論
    3.5 附圖
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間主要的研究成果
致謝
基金資助



本文編號：3186153