發(fā)布時(shí)間：2021-05-13 10:06

　　目的：Calpain是一種鈣離子激活的中性蛋白水解酶。自1964年從大鼠腦內(nèi)提取出來(lái)后，其生物學(xué)功能并不十分清楚。研究發(fā)現(xiàn)，它與肌纖維和神經(jīng)纖維的降解有關(guān)，也可以水解并激活PKC和磷酸化酶b等蛋白質(zhì)。最新的研究表明calpain參與了細(xì)胞凋亡的過(guò)程。但有關(guān)calpain相關(guān)的信號(hào)傳導(dǎo)通路尚不清晰。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用酵母雙雜交系統(tǒng)探討心臟中與calpain相作用的蛋白質(zhì)，從而了解calpain相關(guān)的信號(hào)傳導(dǎo)通路及其在心肌肥厚中的變化。 方法：我們用PCR的方法從含有calpain1大亞基全長(zhǎng)cDNA序列的質(zhì)粒中分別擴(kuò)增全長(zhǎng)基因和它的結(jié)構(gòu)域Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各個(gè)片段的基因并與DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DNA binding domain，DBD）表達(dá)載體重組得到4種誘餌蛋白的表達(dá)載體即pGBKT7-CANP、pGBKT7-CANPⅡ、pGBKT7-CANPⅢ、pGBKT7-CANPⅣ。乙酸鋰轉(zhuǎn)染法分別將上述4種含DBD誘餌質(zhì)粒轉(zhuǎn)入AH109酵母菌中得到AH109／pGBKT7-CANP、AH109／pGBKT7-CANPⅡ、AH109／pGBKT7-CANPⅢ、AH109／pGBKT7-CANPⅣ。再將含人... 

【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：127 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
目錄
縮略語(yǔ)
第一部分 應(yīng)用YTH篩選人心臟cDNA文庫(kù)中能與calpain 1大亞基結(jié)合的蛋白質(zhì)分子
    摘要
    前言
    材料與方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    討論
    小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第二部分 MTH以及Co-IP驗(yàn)證calpain 1大亞基與AES、FHL-2、SH3BGR的結(jié)合作用
    摘要
    前言
    材料與方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 calpain、FHL-2、AES在Angll誘導(dǎo)體外心肌細(xì)胞肥大模型中功能的初步探索
    摘要
    前言
    材料與方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    討論
    小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
綜述
致謝
發(fā)表論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Calpain10基因多態(tài)性與中國(guó)人2型糖尿病遺傳易感性的相關(guān)性研究[J]. 紀(jì)立農(nóng),陳陵霞,韓學(xué)堯,祝方.  中國(guó)糖尿病雜志. 2002(01)
[2]Calpain-10基因的SNP組合變異與2型糖尿病及其臨床代謝性狀的關(guān)系[J]. 項(xiàng)坤三,方啟晨,鄭泰山,賈偉平,王延慶,張蓉,李杰,沈坤雪.  中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志. 2001(06)
[3]Calpain-10基因多態(tài)性與糖耐量異常狀態(tài)、胰島素分泌及胰島素敏感性的相關(guān)性[J]. 項(xiàng)坤三,鄭泰山,賈偉平,王延慶,沈坤雪,李杰.  中華內(nèi)分泌代謝雜志. 2001(05)
[4]Calpain抑制劑-1對(duì)大鼠急性缺血再灌注誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的影響[J]. 徐冬梅,劉正湘.  中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志. 2001(02)
[5]Calpain在卡鉑引起的耳蝸Ⅰ型傳入神經(jīng)系統(tǒng)損害中的作用[J]. 丁大連,王家東,Richard J.Salvi.  中國(guó)耳鼻咽喉顱底外科雜志. 2001(01)
[6]鈣蛋白酶及鈣蛋白酶抑制蛋白mRNA在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制中的作用[J]. 徐建華,張仁利,孫桂華,楊明功,帥宗文,張銳.  中華風(fēng)濕病學(xué)雜志. 2000(06)
[7]Calpain在噪聲損害毛細(xì)胞中的角色[J]. 丁大連,李明,王堅(jiān),Salvi．RJ.  中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合耳鼻咽喉科雜志. 2000(04)
[8]鈣離子與鈣依賴蛋白酶在心肌頓抑中的作用[J]. 朱珊珊.  國(guó)外醫(yī)學(xué).麻醉學(xué)與復(fù)蘇分冊(cè). 2000(04)
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[10]卡配因及其抑制劑在腦缺血中的作用[J]. 肖小華,黃如訓(xùn).  國(guó)外醫(yī)學(xué)(腦血管疾病分冊(cè)). 1999(04)



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