目的:克隆小鼠Foxp3-△PRD（N末端富含脯氨酸區(qū)域缺失的Foxp3片段）和Foxp3-△FKH（C末端FKH區(qū)域缺失的Foxp3片段）基因,構建帶穿膜序列PTD（protein20transduction20domain）的原核表達載體,表達、純化并復性PTD-△PRD、PTD-△FKH、PTD-eGFP-△PRD、PTD-eGFP-△FKH融合蛋白,并初步探討其生物學功能,為進一步研究Foxp3的免疫抑制機制奠定基礎。方法:（1）利用PCR技術擴增獲得小鼠△PRD和△FKH基因,將其克隆至pMD18-T載體,進行單、雙酶切鑒定及序列分析。（2）將測序正確的△PRD和△FKH基因克隆到帶穿膜序列的pET28a-PTD和pET28a-PTD-eGFP原核表達載體中,并在大腸埃希菌Rosetta（DE3）中表達,獲得帶有His標簽的融合蛋白,利用Bio-Rad公司的鎳柱純化融合蛋白,并進行蛋白復性。（3）利用Western-blot技術檢測融合蛋白表達的正確性,流式細胞術和Western-blot檢測融合蛋白穿膜進入小鼠T淋巴細胞瘤株EL-4細胞中的能力,并通過混合淋巴細胞反應初步分... 

【文章來源】：江蘇大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 Foxp3在免疫調節(jié)中的作用
        1.1.1 調節(jié)性T細胞及其在免疫調節(jié)中的作用
        1.1.2 Foxp3的一般特性
        1.1.3 Foxp3的生物學功能
        1.1.4 Foxp3的信號通路
        1.1.5 Foxp3在自身免疫性疾病中的作用
    1.2 PTD在蛋白轉導中的作用
    1.3 本研究的目的和研究內容
        1.3.1 研究目的
        1.3.2 研究意義
        1.3.3 研究方法及技術
        1.3.4 試驗方案的設計
第二章 小鼠Foxp3-△PRD/△FKH基因的克隆
    2.1 材料方法
    2.2 結果
    2.3 討論
第三章 小鼠PTD-Foxp3相關融合蛋白的表達、純化及復性
    3.1 材料方法
    3.2 結果
    3.3 討論
第四章 小鼠PTD-Foxp3相關融合蛋白功能的初步研究
    4.1 材料方法
    4.2 結果
    4.3 討論
第五章 主要結論和展望
    5.1 主要結論
    5.2 展望
參考文獻
附錄
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表的論文



本文編號：3177036