目的構(gòu)建和鑒定重組兩歧雙歧桿菌介導(dǎo)的銅綠假單胞菌外膜蛋白F-I[rBb（pGEX-OprF-I）]疫苗,研究其對小鼠抗銅綠假單胞菌感染的免疫保護(hù)作用。方法 PCR擴增OprF和OprI基因,采用基因拼接法剪切,得到OprF-I融合基因,雙酶切后定向克隆至載體pGEX-1λT,構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEX-OprF-I,將該質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化兩歧雙歧桿菌（Bb）,構(gòu)建rBb（pGEX-OprF-I）疫苗并進(jìn)行雙酶切和PCR鑒定,經(jīng)異丙基-β-D硫代-吡喃半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)表達(dá), SDS-PAGE和Western blot法分析和鑒定表達(dá)產(chǎn)物。將21只BALB/c鼠隨機分成疫苗組、 Bb-pGEX-1λT空載體和Bb對照組,取5×10⁸菌落形成單位（CFU）疫苗口服灌胃,每周連續(xù)接種3 d,持續(xù)3周。初次免疫后4周用5×10⁷ CFU PA01株滴鼻攻擊,攻擊后2周無菌殺鼠,計數(shù)肺組織的細(xì)菌菌落數(shù)。常規(guī)ELISA檢測免疫前、初次免疫后4周和攻擊后2周的小鼠靜脈血中IgG水平。結(jié)果 PCR擴增出1289 bp的OprF-I融合基因;雙酶切和PCR鑒定證實該基... 

【文章來源】：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2019,35(07)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

疫苗免疫及PA01株攻擊后小鼠肺細(xì)菌的菌落數(shù)1:rBb(pGEX-OprF-I)疫苗組;2:空載體對照組;3:Bb對照組．a(chǎn)P＜0．05vs其余兩組．

饗約跎?計數(shù)免疫小鼠肺細(xì)菌的菌落數(shù)發(fā)現(xiàn)，rBb(pGEX-OprF-I)疫苗組的菌落數(shù)量較空載體和Bb對照組明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．05)，空載體和Bb對照組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05，圖4)。1:rBb(pGEX-OprF-I)疫苗組;2:空載體對照組;3:Bb對照組．a(chǎn)P＜0．05vs其余兩組．圖4疫苗免疫及PA01株攻擊后小鼠肺細(xì)菌的菌落數(shù)2．5疫苗組小鼠的血清IgG水平升高通過ELISA檢測小鼠免疫前、初次免疫后4周和攻擊后2周的血清IgG水平(圖5)，結(jié)果表明，同一時間點比較，3組間的免疫前血清IgG水平變化不大，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05)，而初次免疫后4周和攻擊后2周的疫苗組血清IgG水平明顯高于空載體和Bb對照組(P＜0．01);同組在不同時間點比較，3組的血清IgG水平均表現(xiàn)為攻擊后2周＞初次免疫后4周＞免疫前，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．01)。1:免疫前;2:初次免疫后4周;3:攻擊后2周．bP＜0．01vs1;dP＜0．01vs2．圖5疫苗免疫及PA01株攻擊后小鼠血清IgG水平3討論Gomi等［19］構(gòu)建了腺病毒介導(dǎo)的OprF蛋白疫苗，將其免疫小鼠可產(chǎn)生強烈抗感染的細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答;Hassan等［20］將重組OprI蛋白疫苗皮下接種BALB/c小鼠后也可使免疫小鼠產(chǎn)生較高水平的特異性IgG，減輕肺組織損傷，提示OprF和OprI具有良好的免疫原性。多抗原成分的融合是目前Pa疫苗開發(fā)的重要方向［21］。Zhang等［22］發(fā)現(xiàn)重組減毒傷寒沙門菌介導(dǎo)的F-1融合蛋白疫苗皮下注射小鼠后可在血清和肺組織

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3136798