表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis, SE）屬革蘭氏陽(yáng)性球菌,凝固酶陰性,廣泛存在于人皮膚和粘膜表面,為條件致病菌,其正常情況下很少引起宿主的感染。但近年來(lái),隨著各類(lèi)移植及醫(yī)用材料在臨床上的廣泛應(yīng)用,表皮葡萄球菌成為引起院內(nèi)感染的前四位病原體之一,引起廣泛重視。其致病性主要在于能在醫(yī)用材料表面形成生物膜（biofilm）,從而增強(qiáng)對(duì)抗生素的耐藥性,抵御機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng),造成慢性反復(fù)感染,所致疾病難以治愈。表皮葡萄球菌生物膜的主要組成成分是細(xì)胞間多糖黏附素（Polysaccharide Intercellular Adhesion, PIA）,它由ica操縱子編碼的蛋白參與合成,主要介導(dǎo)了細(xì)菌間的互相黏附。細(xì)菌的雙組分信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)（Two-component Signal Transduction Systems, TCSs）廣泛存在于革蘭氏陽(yáng)性和陰性細(xì)菌中,參與感應(yīng)外界環(huán)境信號(hào),并迅速將信號(hào)傳入菌體內(nèi),從而啟動(dòng)一系列相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄、表達(dá)以及表達(dá)產(chǎn)物的修飾,以增強(qiáng)細(xì)菌在不同環(huán)境下的生存能力。此外,研究表明雙組分信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)還參與調(diào)控病原菌的毒力和致病性,... 

【文章來(lái)源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：118 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

表皮葡萄球菌1457株LytS和LytR蛋白的功能域分析

砥て咸亞蚓鶯yts瓜雙組分信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)調(diào)控功能的研究圖1一 2sE1457)妙tsR基因同源重組機(jī)制及其上下游序列分析Figurel一 2PhysiealmaPofthely巧次 oPeronofS.eP翻lerm衣li，14萬(wàn) 7and eonstructionofly巧火 knoekoutmutant ArrowsdePietoPenreadingframesandindieatetheirorientations.如才朋 oPeronwererePlaced withthee叨 hromyeinresistaneegene(ermB)asindieated.TheermBgeneandehromosomal regionsflankingtheeorresPondingdeletionswereamPlifiedbyPCRandelonedintoPlasmidPBTZ， yieldingtheintegrationveetorsPBTZ一』 lytSR.Theerossesindicatethesitesofhomologousreeomblnation.skb一 2.skb一 3.3kb圖1一3大腸桿菌中質(zhì)粒pBTZ一刁加了￡天酶切鑒定Figurel一 3ValidationthePlasmidPBTZ一約，巧月 inE.coliDH5abyrestriction endonucleasedoubledigest Lanel:D15000DNAmarker;LaneZ:thereeombinantPlasmidPBTZ一JlytSR;Lane3:reeuttingPBTZ一 JlyISRbyEeoRIandNhel;Lane4:recuttingPBTZ一』 lytSRbyBamHIandHindlll2.2同源重組質(zhì)粒pBTZ通加巧次在金黃色葡萄球菌RN4220中的修飾及在表皮葡萄球菌1457株中的轉(zhuǎn)化大腸桿菌來(lái)源的DNA進(jìn)入葡萄球菌體系后由于革蘭陰性和陽(yáng)性菌的宿主特異陛識(shí)別系統(tǒng) (hostspeeifieitydetermination，hsd)不同會(huì)被降解。因此在轉(zhuǎn)化表皮葡萄球菌之前需先將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入限制缺陷 (:estrictiondeficient)的金黃色葡萄球菌RN422O株中進(jìn)行修飾。同時(shí)

分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并以1457野生株基因組模板為陰性對(duì)照。結(jié)果顯示以突變株基因組為模板能擴(kuò)增出與預(yù)期大小相一致的DNA片段，分別為2.skb和3.Okb，而以野生株基因組為模板則不能擴(kuò)增出相應(yīng)大小的片段(圖1一4)。隨后對(duì)突變株的PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，結(jié)果顯示妙了￡天基因已經(jīng)成功被紅霉素抗性基因替換。skb 2.skb圖1一4基因組PCR鑒定表皮葡萄球菌lytSR突變株Figurel一 4ValidationofS.eP翻份rmi減 151457約，乙寶況 strainbygenomicPCR Lane1and3:lylSRdownstreamfragmentPlusermfragment(3.okb)fromSE1457WTand』lytSR， resPeetively;Lane2and4:lytSRupstreamfra卿 entplusermfra腳ent(2·skb)from SE1457WTand」lylSR，resPeetively;M:DL15000bpDNAmarker.以突變株cDNA作為模板PcR擴(kuò)增lytR基因，結(jié)果未能得到特異性的產(chǎn)物，而以1457野生株作為陽(yáng)性對(duì)照的PCR反應(yīng)擴(kuò)增出了與預(yù)期一致的473bp大小的核酸片段(圖l一5)。


本文編號(hào)：3121691