目的構(gòu)建KPIC原位胰腺癌小鼠模型用于吲哚胺2,3-雙加氧酶1（indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1）抑制劑藥效學(xué)研究。方法采用實(shí)時(shí)定量熒光PCR和Western blot等方法鑒定KPIC細(xì)胞中IDO1的表達(dá)情況;使用HPLC檢測IDO1抑制劑1-甲基-L-色氨酸（1-methyl-L-tryptophan,1-L-MT）對KPIC細(xì)胞中IDO1活性的抑制作用及KPIC原位胰腺癌小鼠血清中IDO1活性;接種KPIC細(xì)胞到小鼠胰腺構(gòu)建KPIC原位胰腺癌小鼠;免疫組化法檢測KPIC原位胰腺癌小鼠腫瘤中IDO1、腫瘤增殖指數(shù)Ki67、膽系標(biāo)志物Sox9的表達(dá)。結(jié)果經(jīng)mRNA及蛋白質(zhì)水平鑒定,KPIC細(xì)胞內(nèi)有IDO1及其同工酶的表達(dá);1-L-MT能夠下調(diào)KPIC細(xì)胞中IDO1活性;KPIC原位胰腺癌小鼠構(gòu)建成功,在原位腫瘤中IDO1、Ki67和Sox9均有表達(dá),小鼠血清中IDO1活性上調(diào)。結(jié)論 KPIC原位胰腺癌小鼠表達(dá)IDO1,可用于IDO1抑制劑的篩選及藥效學(xué)評價(jià)。 

【文章來源】：復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2019,46(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

KPIC細(xì)胞中IDO1及其同工酶的表達(dá)A:mＲNAlevelsmeasuredbyreal-timeqPCＲ;B:ProteinlevelsmeasuredbyWesternblot．

yn/Trp比值均恢復(fù)到對照組的水平(表2)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，1-L-MT不僅可以下調(diào)KPIC細(xì)胞本底的IDO1活性，還可以逆轉(zhuǎn)異常上調(diào)的IDO1活性。KPIC細(xì)胞可用于后續(xù)IDO1抑制劑藥效學(xué)研究動物模型的構(gòu)建。A-C:KPICcellsweretreatedwith1-L-MT(50or100μmol/L，24h);D-F:KPICcellswerepretreatedwithIFN-γ(100ng/mL，24h)，thentreatedwith1-L-MT(100μmol/L，24h)．Ｒesultswereexpressedasx－±sfrom3independentexperiments．(1)P＜0．05．圖3HPLC檢測1-L-MT對KPIC細(xì)胞中IDO1活性的抑制作用Fig3Inhibitoryeffectof1-L-MTonIDO1activityinKPICcellsdeterminatedbyHPLC表2KPIC細(xì)胞上清中Trp和Kyn含量及比值Tab2ConcentrationsofTrpandKynandtheratioofKyn/TrpinthesupernatantofKPICcellsIndexGroup1Group2ABCABCTrp(μmol/L)21．68±0．6020．25±0．9819．98±0．6624．05±2．3120．53±0．3523．48±1．14Kyn(μmol/L)0．30±0．080．15±0．040．13±0．010．21±0．040．31±0．050．20±0．03(Kyn/Trp)×1001．40±0．410．73±0．140．65±0．061．05±0．241．51±0．210．86±0．15Group1A:KPICcells;Group1B:KPICcellstreatedwith50μmol/L1-L-MTfor24h;Group1C:KPICcellstreatedwith100μmol/L1-L-MTfor24h;Group2A:KPICcells;Group2B:KPICcellstreatedwith100ng/mLIFN-γfor24h;Group2C:KPICcellspretreatedwith100ng/mLIFN-γfor24h，thentreatedwith100μmol/L1-MTfor24h．KPIC原位胰腺癌小鼠模型構(gòu)建選取5只6～8周雌性C57BL/6小鼠，將

)。與野生型C57小鼠相比(表3)，KPIC原位胰腺癌小鼠的Trp含量較低(圖5A，P=0．0006)，而Kyn含量較高(P=0．0212，圖5B)，接受手術(shù)的KPIC原位胰腺癌小鼠血清中IDO1活性顯著升高(P=0．0285，圖5C)。SerumofKPICorthotopicpancreaticcancermice(n=5)andwildtypemice(n=5)werecollectedonday20aftertumorimplantation．Ｒesultswereexpressedasx－±sfrom3independentexperiments．(1)P＜0．05，(2)P＜0．001．WT:Wildtype．圖5KPIC原位胰腺癌小鼠血清中IDO1活性Fig5SerumIDO1activityofKPICorthotopicpancreaticcancermice185


本文編號：3118971