本文關(guān)鍵詞：可視化裸鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型的建立及評(píng)價(jià)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：本研究根據(jù)子宮內(nèi)膜異位癥特性,對(duì)卵巢巧克力囊腫患者的在位及異位子宮內(nèi)膜組織中的內(nèi)膜細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng),并將培養(yǎng)成功的細(xì)胞懸液注射至裸鼠腹部皮下,建立可視化裸鼠子宮內(nèi)膜內(nèi)異癥模型,并評(píng)價(jià)該方法的成模情況,為進(jìn)一步研究子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)理等提供可靠模型。 方法：選取卵巢巧克力囊腫患者的在位及異位子宮內(nèi)膜組織,分離出內(nèi)膜細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng),并將細(xì)胞分為分離組(腺上皮細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞)和混合組,然后觀察各組細(xì)胞的生長(zhǎng)特性,應(yīng)用吉姆薩染色進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)鑒定,同時(shí)應(yīng)用免疫熒光染色進(jìn)行細(xì)胞特異性鑒定(波形蛋白及角蛋白的表達(dá)),最后將200u1不同數(shù)量(1.0×106、2.5×106、5.0×106、1.0×107)的各組細(xì)胞懸液注射至雌性裸鼠(5-6周齡)的腹部皮下,隨后分期觀察裸鼠皮下注射部位的變化,同時(shí)剝離種植的異位病灶制作標(biāo)本,進(jìn)行HE染色,光鏡下觀察各期病理組織學(xué)形態(tài),遂對(duì)有腺體生長(zhǎng)的異位病灶進(jìn)行免疫組化檢測(cè),進(jìn)一步明確組織細(xì)胞的類型,最終比較分析各方法所得模型的成模率及成模時(shí)間。 結(jié)果：分離培養(yǎng)的腺上皮細(xì)胞在體外不能傳代,分離培養(yǎng)的間質(zhì)細(xì)胞及混合培養(yǎng)的各組細(xì)胞均可傳代,混合培養(yǎng)的內(nèi)膜細(xì)胞的增殖能力較分離培養(yǎng)的間質(zhì)細(xì)胞強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),混合培養(yǎng)的異位內(nèi)膜細(xì)胞的增殖能力較在位內(nèi)膜細(xì)胞強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。實(shí)驗(yàn)中觀察到生長(zhǎng)良好的異位病灶呈隆起的囊泡樣結(jié)構(gòu),表面有血管生成,病理學(xué)證實(shí)其內(nèi)有子宮內(nèi)膜腺體形成,免疫組化結(jié)果確定異位病灶細(xì)胞與人類內(nèi)膜細(xì)胞同源；各組在第10天、第15天形成的異位病灶體積與5天時(shí)異位病灶體積比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),在第10天與第15天時(shí)形成的異位病灶體積比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。不同數(shù)量的在位細(xì)胞組模型在第5天、第10天和第15天時(shí)各組間成模率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中細(xì)胞數(shù)量為5.0×106和1.0×107時(shí)的成模率比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；不同數(shù)量的異位細(xì)胞組模型在第5天、第10天和第15天時(shí)的成模率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中細(xì)胞數(shù)量為5.0×106和1.0×107時(shí)的成模率比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；細(xì)胞數(shù)量為5.0×106/200u1時(shí),異位細(xì)胞組的成模率高于在位細(xì)胞,比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論：腺上皮細(xì)胞必須與間質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)才能傳代,間質(zhì)細(xì)胞能夠傳代但增殖能力較混合的內(nèi)膜細(xì)胞弱,混合培養(yǎng)的異位內(nèi)膜細(xì)胞較在位內(nèi)膜細(xì)胞增殖能力強(qiáng)；應(yīng)用混合培養(yǎng)的第5-6代異位內(nèi)膜細(xì)胞,以5.0×106/200u1的濃度注射到雌性裸鼠腹部皮下,能夠成功構(gòu)建出子宮內(nèi)膜異位癥模型,該方法成模時(shí)間短,成模率高,實(shí)現(xiàn)了異位病灶的可視化。
【關(guān)鍵詞】：子宮內(nèi)膜異位癥 子宮內(nèi)膜細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng) 動(dòng)物模型 裸鼠
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R-332;R711.71
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• ~.略語/符號(hào)說明11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 對(duì)象和方法15-23
• 1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象15
• 1.1 標(biāo)本來源15
• 1.2 標(biāo)本獲取過程15
• 1.2.1 在位內(nèi)膜獲取15
• 1.2.2 異位內(nèi)膜獲取15
• 1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物15
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑15-16
• 2.1 主要儀器設(shè)備15-16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)試劑16
• 2.3 其他實(shí)驗(yàn)材料16
• 3 實(shí)驗(yàn)方法16-22
• 3.1 子宮內(nèi)膜細(xì)胞的培養(yǎng)17-18
• 3.1.1 子宮內(nèi)膜細(xì)胞的混合培養(yǎng)17
• 3.1.2 子宮內(nèi)膜細(xì)胞的分離培養(yǎng)17
• 3.1.3 子宮內(nèi)膜細(xì)胞傳代培養(yǎng)17-18
• 3.1.4 細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)18
• 3.2 子宮內(nèi)膜細(xì)胞的鑒定18-19
• 3.2.1 子宮內(nèi)膜細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定18
• 3.2.2 子宮內(nèi)膜細(xì)胞特異性鑒定18-19
• 3.3 繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線19
• 3.4 細(xì)胞凍存19-20
• 3.5 細(xì)胞復(fù)蘇20
• 3.6 動(dòng)物分組20-21
• 3.7 觀察裸鼠病灶并取材21
• 3.8 組織病理學(xué)檢測(cè)21
• 3.9 免疫組織化學(xué)檢測(cè)21-22
• 3.10 異位癥成模標(biāo)準(zhǔn)22
• 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法22-23
• 結(jié)果23-26
• 1 子宮內(nèi)膜細(xì)胞形態(tài)學(xué)特點(diǎn)23
• 1.1 原代培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜細(xì)胞23
• 1.2 復(fù)蘇后的子宮內(nèi)膜細(xì)胞23
• 2 子宮內(nèi)膜細(xì)胞鑒定23
• 2.1 子宮內(nèi)膜細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定23
• 2.2 子宮內(nèi)膜細(xì)胞特異性鑒定23
• 3 細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)生長(zhǎng)曲線及增殖能力比較23-24
• 4 異位病灶病理HE染色結(jié)果24
• 5 異位病灶免疫組織化學(xué)結(jié)果24-25
• 6 內(nèi)異癥裸鼠模型結(jié)果25-26
• 6.1 裸鼠一般情況25
• 6.2 異位病灶形成25
• 6.3 異位病灶體積比較分析25-26
• 6.4 異位病灶成模率比較26
• 討論26-34
• 1 子宮內(nèi)膜細(xì)胞的特點(diǎn)及鑒定方法26-28
• 2 子宮內(nèi)膜細(xì)胞的培養(yǎng)方法28-29
• 3 內(nèi)異癥模型移植物的選擇29-30
• 4 子宮內(nèi)膜異位癥動(dòng)物模型的建立30-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-39
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明39-40
• 附錄40-43
• 綜述43-61
• 綜述參考文獻(xiàn)54-61
• 致謝61

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 湯淼;王敏;任霞;楊秀麗;彭超;周應(yīng)芳;;生存素在子宮腺肌病異位病灶中的表達(dá)及其意義[J];中國(guó)婦產(chǎn)科臨床雜志;2007年03期

2 陳崢崢;凌斌;;催乳素在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病機(jī)制中作用的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(計(jì)劃生育/生殖健康分冊(cè));2006年05期

3 李妍;李迅;;子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞及基質(zhì)細(xì)胞的分離培養(yǎng)和鑒定[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2008年03期

4 王海燕,薛曉鷗,姜恩魁,戴俊峰;人子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞及基質(zhì)細(xì)胞分離方法的研究[J];錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年04期

5 閆桂英,鄭慕白,章漢旺,靳鐳,林華,朱桂金;細(xì)胞間粘附分子-1在子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜、腹腔液及異位灶中的表達(dá)及分析[J];實(shí)用婦產(chǎn)科雜志;2005年03期

6 譚先杰,劉東遠(yuǎn),郎景和,沈鏗,冷金花,孫大為,朱蘭,劉珠鳳,許秀英;子宮內(nèi)膜腺上皮及基質(zhì)細(xì)胞分離、培養(yǎng)作為子宮內(nèi)膜異位癥體外細(xì)胞模型的探索[J];現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展;2002年01期

7 杭愛國(guó),劉玲,吳峗,錢海虹,周美華,胡莉萍;子宮內(nèi)膜異位癥中整合素表達(dá)的研究[J];現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展;2002年02期

8 陽艷軍;冷金花;董U，

本文編號(hào)：311336