第一部分miR-145調(diào)控單核巨噬細(xì)胞的增殖和凋亡目的：研究miR-145對(duì)單核巨噬細(xì)胞增殖和凋亡的調(diào)控作用。方法：THP-1和HEK 293細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染了miR-145前體和抑制劑后,運(yùn)用XTT、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的方法檢測(cè)細(xì)胞增殖活力,運(yùn)用TUNEL染色、Bax染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。分離OPG基因剔除小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞,轉(zhuǎn)染miR-145前體或抑制劑,運(yùn)用XTT、Annex in V/PI染色檢測(cè)細(xì)胞增殖和凋亡情況,以Western blotting檢測(cè)過(guò)表達(dá)或抑制miR-145后細(xì)胞增殖（cyclin B1、cyclin D3、CDK4）和凋亡相關(guān)蛋白（Bax、caspase-9、caspase-3、Bcl-2、PARP）的變化。結(jié)果：細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-145前體后,細(xì)胞增殖活力下降,增殖受抑制,而細(xì)胞凋亡明顯增加。而內(nèi)源性miR-145受抑制后,細(xì)胞增殖活力增加,凋亡明顯受抑制。結(jié)論：miR-145參與調(diào)控單核巨噬細(xì)胞的增殖和凋亡。第二部分miR-145參與調(diào)控代謝性炎癥過(guò)程目的：明確miR-145在糖尿病代謝性炎癥過(guò)程中的作用。方法：C57BL/6J小鼠頸靜脈插管后隨機(jī)分為三組,連續(xù)... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

轉(zhuǎn)染miR--145前體或抑制劑后份G變化

乙2﹄qOEnUDay3.OPG完全剔除后，miR一145對(duì)細(xì)胞增殖活力的影響(圖3C)為了進(jìn)一步確定miR一145抑制增殖的作用是否完全通過(guò)OPG，我們分離了OPG基因剔除小鼠的骨髓單個(gè)核細(xì)胞，電穿孔轉(zhuǎn)染了miR一145的前體，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR一145仍然明顯抑制細(xì)胞的增殖活力，但是與正常小鼠相比，這種抑制作用相對(duì)較弱，這說(shuō)明miR一145抑制細(xì)胞增殖的作用部分通過(guò)下調(diào)OPG表達(dá)實(shí)現(xiàn)。C1oo~7Uo貓邀一巴日%d︾uo勻班巴=0﹄ d025乏乏8 ConPr..而R·145opG.I+(Cs7aU6)C加P找卜而R一 146ConP的6.而R一145opG今氣叼12。)opG一飾一ce

甸 clinD3ACtinCOK4ACtin四、miR一145促進(jìn)細(xì)胞凋亡1.TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡(圖4A、B)轉(zhuǎn)染miR一145抑制劑或前體后，用TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況，結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)miR一145后，陽(yáng)性染色細(xì)胞增多，說(shuō)明細(xì)胞凋亡增加，而抑制內(nèi)源性miR一145后，細(xì)胞凋亡明顯減少，加入OPG細(xì)胞因子可以部分逆轉(zhuǎn)miR一145的促凋亡作用。


本文編號(hào)：3111098